论文目录 | |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-24页 |
| 1.1 肝细胞的分离 | 第11-13页 |
| 1.1.1 非酶消化法 | 第12页 |
| 1.1.2 酶消化法 | 第12-13页 |
| 1.2 肝细胞的培养 | 第13-16页 |
| 1.2.1 肝细胞的原代培养及方法 | 第13-15页 |
| 1.2.2 肝细胞的传代培养 | 第15-16页 |
| 1.3 肝细胞的鉴定 | 第16-17页 |
| 1.4 SREBPs基因的研究 | 第17-21页 |
| 1.4.1 SREBPs简介 | 第17-18页 |
| 1.4.2 SREBPs前体裂解 | 第18-19页 |
| 1.4.3 SREBPs的转录调控 | 第19-21页 |
| 1.5 脂肪代谢相关转录因子与限速酶基因介绍 | 第21-22页 |
| 1.5.1 C/EBPα核转录因子 | 第21-22页 |
| 1.5.2 FAS | 第22页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 1.7 研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 肝细胞的分离、培养、鉴定及SREBP-2 诱导成脂的研究 | 第24-34页 |
| 2.1 材料与方法 | 第25-26页 |
| 2.1.1 动物肝脏组织 | 第25页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第25页 |
| 2.1.3 主要耗材 | 第25页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.1.5 试验试剂的配制 | 第26页 |
| 2.2 实时定量PCR引物的设计与合成 | 第26页 |
| 2.3 肝细胞分离培养与鉴定 | 第26-29页 |
| 2.3.1 肝细胞分离 | 第26-27页 |
| 2.3.2 肝细胞原代培养 | 第27页 |
| 2.3.3 传代培养 | 第27-28页 |
| 2.3.4 过碘酸-雪夫反应鉴定肝细胞 | 第28-29页 |
| 2.4 介导小鼠SREBP-2 过表达腺病毒的扩繁 | 第29页 |
| 2.5 病毒滴度测定 | 第29页 |
| 2.6 最佳感染复数的测定 | 第29-30页 |
| 2.7 肝细胞传代培养与病毒侵染 | 第30页 |
| 2.8 总RNA提取与反转录 | 第30-31页 |
| 2.9 油红-O染色观察 | 第31-32页 |
| 2.10 SREBP-2 等基因的定量分析 | 第32-34页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第34-46页 |
| 3.1 实时荧光定量PCR引物设计 | 第34页 |
| 3.2 肝细胞分离培养与鉴定 | 第34-39页 |
| 3.2.1 肝细胞的原代培养 | 第34-37页 |
| 3.2.2 肝细胞的传代培养 | 第37-38页 |
| 3.2.3 过碘酸 -雪夫反应（PAS）鉴定肝细胞 | 第38-39页 |
| 3.3 病毒滴度测定与MOI值测定 | 第39页 |
| 3.4 Ad-SREBP-2 与Ad-CMV病毒侵染细胞 | 第39-40页 |
| 3.5 侵染病毒的肝细胞油红-O染色 | 第40-42页 |
| 3.6 总RNA的提取与基因定量 | 第42-46页 |
| 3.6.1 肝细胞总RNA的提取与反转录 | 第42页 |
| 3.6.2 SREBP2基因过表达检测 | 第42-43页 |
| 3.6.3 脂代谢相关基因表达检测 | 第43-46页 |
| 第四章 结果讨论与结论 | 第46-54页 |
| 4.1 肝细胞的分离纯化 | 第46-47页 |
| 4.2 肝细胞的培养 | 第47页 |
| 4.3 肝细胞的鉴定 | 第47-48页 |
| 4.4 Ad-SREBP-2 腺病毒侵染肝细胞 | 第48-50页 |
| 4.4.1 介导外源基因转染肝细胞 | 第48-49页 |
| 4.4.2 Ad Easy腺病毒载体系统 | 第49页 |
| 4.4.3 病毒滴度和MOI值测定 | 第49-50页 |
| 4.4.4 Ad-SREBP-2 病毒侵染肝细胞 | 第50页 |
| 4.5 总RNA的提取 | 第50页 |
| 4.6 SREBP-2 基因对肝细胞脂滴沉积的影响 | 第50-51页 |
| 4.7 SREBP-2 对FAS、C/EBPα和SREBP-1c的调控作用 | 第51-53页 |
| 4.7.1 SREBP-2 与SREBP-1c家族内相互调控作用 | 第51页 |
| 4.7.2 SREBP-2 调节FAS转录表达 | 第51-52页 |
| 4.7.3 SREBP-2 调节C/EBPα转录表达 | 第52-53页 |
| 4.8 结果与结论 | 第53-54页 |
| 附录 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
