论文目录 | |
| 致谢 | 第1-8
页 |
| 主要符号对照表 | 第8-10
页 |
| 摘要 | 第10-11
页 |
| 1 文献综述 | 第11-25
页 |
| · 植物在逆境胁迫下的基因表达 | 第11-13
页 |
| · ABRE 介导的ABA 依赖的信号通路 | 第11
页 |
| · 依赖ABA 的信号通路中的其它顺式作用元件 | 第11-12
页 |
| · 在非生物胁迫中的不依赖于ABA 的信号通路 | 第12
页 |
| · 胁迫应答反应中不同顺式作用元件介导的信号交叉 | 第12-13
页 |
| · AP2/EREBP 类转录因子 | 第13-18
页 |
| · ERF/AP2 结构域的发现 | 第13-14
页 |
| · AP2/EREBP 转录因子的结构特征 | 第14-15
页 |
| · ERF/AP2 结构域的分类 | 第15-17
页 |
| · ERF/AP2 结构域的起源与进化 | 第17-18
页 |
| · DREB 类转录因子及DRE 介导的信号通路 | 第18-22
页 |
| · DRE 元件及DREB 转录因子 | 第18
页 |
| · 受DRE81/CBF 调控的下游基因 | 第18-19
页 |
| · DRE81/CBF 基因表达的上游调控 | 第19
页 |
| · DRE81/CBF 基因表达的自身调控 | 第19
页 |
| · ICE1-CBF 信号通路的负调控 | 第19-20
页 |
| · ICE1-CBF 信号通路的转录后调控 | 第20-21
页 |
| · DREB 转录因子的DNA 结合活性分析 | 第21
页 |
| · DREB 转录激活机制的研究 | 第21-22
页 |
| · 其它植物系统中的DREB 转录调控 | 第22
页 |
| · DREB 提高植物抗逆性的研究 | 第22-23
页 |
| · 烟草研究概述 | 第23-25
页 |
| 2 引言 | 第25-27
页 |
| · 研究的目的和意义 | 第25-26
页 |
| · 研究的内容及思路 | 第26-27
页 |
| · 烟草NtDREB 基因的克隆和表达模式分析 | 第26
页 |
| · 酵母单杂交和凝胶滞留分析NtDREB 基因的功能 | 第26
页 |
| · DRE81A 类转录调控区起转录激活作用的关键氨基酸确定 | 第26
页 |
| · ERF/AP2 结构域中与DRE 元件结合的关键氨基酸鉴定 | 第26-27
页 |
| 3 材料与方法 | 第27-40
页 |
| · 实验材料和仪器 | 第27
页 |
| · 实验材料 | 第27
页 |
| · 植物材料 | 第27
页 |
| · 菌株和载体 | 第27
页 |
| · 试剂 | 第27
页 |
| · 实验仪器 | 第27
页 |
| · 实验方法 | 第27-40
页 |
| · 植物材料的处理 | 第27-28
页 |
| · CTAB 法提取烟草基因组DNA | 第28
页 |
| · 试剂配制 | 第28
页 |
| · 基因组DNA 的粗提 | 第28
页 |
| · 基因组DNA 的纯化 | 第28
页 |
| · Trizol 法提取烟草总RNA | 第28-29
页 |
| · 试剂和耗材 | 第28-29
页 |
| · 提取RNA 的实验步骤 | 第29
页 |
| · RT-PCR | 第29
页 |
| · Genome Walking | 第29-31
页 |
| · 基因克隆中所用的引物 | 第31-32
页 |
| · 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32-33
页 |
| · 酵母单杂交实验 | 第33-36
页 |
| · 酵母细胞的转化 | 第33-35
页 |
| · Colony-lift Filter Assay | 第35-36
页 |
| · PDI 融合蛋白表达载体的构建 | 第36
页 |
| · 蛋白的诱导表达检测 | 第36-37
页 |
| · His-Tag 融合蛋白的表达纯化 | 第37
页 |
| · 凝胶滞留（EMSA）分析 | 第37-38
页 |
| · 转录调控区激活关键氨基酸的突变 | 第38-39
页 |
| · ERF/AP2 区与DRE 元件结合关键氨基酸的突变 | 第39-40
页 |
| 4 结果与分析 | 第40-58
页 |
| · 烟草NTDREB 基因的克隆 | 第40-45
页 |
| · 从EST 库中BLAST 得到烟草EST 序列 | 第40-41
页 |
| · NtDREB 基因ERF/AP2 结构域的克隆 | 第41-42
页 |
| · 5’-Genome Walking 扩增基因5’端序列 | 第42-43
页 |
| · 3’-Genome Walking 克隆基因3’端序列 | 第43-44
页 |
| · NtDREB 基因编码区克隆 | 第44-45
页 |
| · NTDREB 基因的序列特征分析和同源比对 | 第45-49
页 |
| · NtDREB 基因的核酸和蛋白质序列分析 | 第45-46
页 |
| · NtDREB 基因的序列比对和系统发生分析 | 第46-49
页 |
| · NTDREB 基因的表达模式分析 | 第49
页 |
| · NTDREB 的功能分析 | 第49-58
页 |
| · NtDREB 的转录激活鉴定 | 第49-50
页 |
| · DRE81A 类转录因子的转录调控区关键氨基酸的寻找 | 第50-51
页 |
| · 转录调控区定点突变分析 | 第51-52
页 |
| · NTDREB 与DRE 顺式作用元件结合的功能分析 | 第52-54
页 |
| · NTDREB-PDI 融合蛋白表达载体的构建 | 第54
页 |
| · NTDREB-PDI 融合蛋白的诱导表达 | 第54-55
页 |
| · NTDREB-PDI 融合蛋白的提取纯化 | 第55
页 |
| · 凝胶滞留分析NTDREB 与顺式作用元件的结合能力 | 第55-56
页 |
| · ERF/AP2 结构域中与DRE 元件结合的关键氨基酸鉴定 | 第56-58
页 |
| 5 结论与讨论 | 第58-63
页 |
| · 结论 | 第58-59
页 |
| · 讨论 | 第59-63
页 |
| · NtDREB 基因功能分析 | 第59
页 |
| · DRE81A 类转录调控区起转录激活作用的关键氨基酸分析 | 第59-61
页 |
| · ERF/AP2 结构域中与DRE 元件结合的关键氨基酸分析 | 第61-63
页 |
| 参考文献 | 第63-71
页 |
| ABSTRACT | 第71-72页 |
