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小麦甲基结合蛋白TaMBD1的体外表达及互作蛋白分析
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小麦甲基结合蛋白TaMBD1的体外表达及互作蛋白分析
论文目录
 
致谢第1-7页
摘要第7-8页
1 文献综述第8-16页
　　· DNA 甲基化与植物生长调控第8页
　　· 植物MBD蛋白第8-9页
　　· MBD蛋白的功能第9-11页
　　· 蛋白质互作研究方法第11-16页
　　　　· 串联亲和纯化第11-13页
　　　　· 噬菌体展示技术第13页
　　　　· 酵母双杂技术第13-14页
　　　　· 新发展的研究互作技术第14-16页
2 引言第16页
3 材料与方法第16-26页
　　· 实验材料第16-17页
　　　　· 植物材料和菌株第16页
　　　　· 质粒载体第16页
　　　　· 工具酶及试剂盒第16-17页
　　　　· 主要仪器第17页
　　　　· LB 培养基第17页
　　　　· 抗体第17页
　　· 实验方法第17-26页
　　　　· 培养工程菌第17-22页
　　　　　　· 重组载体的构建和转化第17-18页
　　　　　　· 小体积诱导表达实验第18页
　　　　　　· SDS-PAGE 电泳第18-20页
　　　　　　· 大体积诱导表达条件优化第20页
　　　　　　· Western 所需试剂配制第20-21页
　　　　　　· Western blot 鉴定第21-22页
　　　　· 小麦叶片总蛋白提取第22-23页
　　　　· 蛋白纯化以及互作纯化第23-24页
　　　　　　· 缓冲液的配置第23页
　　　　　　· TaMBD1 蛋白纯化第23-24页
　　　　　　· 蛋白互作纯化第24页
　　　　· 双向电泳第24-26页
　　　　　　·配等电聚焦所需溶液第24-25页
　　　　　　· 泡胀胶条和等电聚焦第25页
　　　　　　· SDS-PAGE第25-26页
　　　　· 质谱分析第26页
4 结果分析第26-38页
　　· TaMBD1 原核表达载体的构建和诱导表达第26-29页
　　　　· TaMBD1 原核表达载体的构建第26-28页
　　　　· 转化工程菌鉴定结果第28页
　　　　· 小量诱导表达鉴定结果第28-29页
　　· 重组蛋白纯化条件优化第29-31页
　　　　· 大量诱导表达条件优化第29-30页
　　　　· 不同咪唑浓度对重组蛋白纯化的影响第30-31页
　　· TaMBD1 互作蛋白的筛选第31-33页
　　　　· 小麦叶片水溶蛋白提取第31页
　　　　· 叶片中与TaMBD1 互作蛋白的筛选第31-33页
　　　　· 互作侯选蛋白的分离第33页
　　· 侯选蛋白的质谱分析第33-38页
5 结论与讨论第38-41页
　　· 诱导表达和纯化条件摸索的条件第39页
　　· 互作研究方法的选择第39页
　　· 互作蛋白的确定以及可能的功能分析第39-41页
参考文献第41-45页
英文摘要第45-46页

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