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无外源L-脯氨酸产反式-4-羟脯氨酸大肠杆菌的构建及发酵优化

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无外源L-脯氨酸产反式-4-羟脯氨酸大肠杆菌的构建及发酵优化
论文目录
 
摘要第1-4页
Abstract第4-8页
第一章 绪论第8-14页
  · 反式4羟脯氨酸概述第8-9页
    · 反式4羟脯氨酸的应用第8页
    · 反式4羟脯氨酸的生产方法第8-9页
  · 谷氨酸激酶简介第9-10页
  · 外源基因的表达第10-12页
    · 宿主与载体的选择第10-11页
    · 启动子的选择第11页
    · 多基因共表达策略第11-12页
  · 国内外研究现状第12页
  · 本课题的研究意义和研究内容第12-14页
    · 研究意义第12-13页
    · 研究内容第13-14页
第二章 材料与方法第14-27页
  · 材料第14-16页
    · 菌种和质粒第14页
    · 主要试剂第14页
    · 主要仪器设备第14-15页
    · 培养基第15页
    · 主要溶液第15-16页
  · 高产L-脯氨酸重组大肠杆菌的构建及检测方法第16-21页
    · 大肠杆菌BL21(DE3)基因组的提取第16-17页
    · PCR引物设计第17页
    · 质粒的提取第17页
    · 扩增proBA的PCR反应体系及反应条件第17-18页
    · PCR产物的纯化第18页
    · 大肠杆菌感受态细胞的制备第18页
    · 含有proBA重组质粒的构建第18-19页
    · 大肠杆菌感受态细胞的转化方法(热激法)第19页
    · 酶切鉴定阳性重组质粒第19页
    · DNA测序鉴定重组质粒第19页
    · 全质粒PCR定点突变方法第19页
    · 全质粒PCR产物转化大肠杆菌的方法第19-20页
    · DNA测序鉴定点突变重组质粒第20页
    · 在重组质粒上插入色氨酸串联启动子的方法第20页
    · SDS-PAGE检测谷氨酸激酶的表达第20-21页
    · 重组菌L-脯氨酸积累量的检测方法第21页
  · 产反式4羟脯氨酸重组大肠杆菌的构建及检测方法第21-25页
    · 含脯氨酸 4-羟化酶基因质粒的提取第21页
    · 共表达载体的构建第21-23页
    · 大肠杆菌感受态细胞的制备第23页
    · 大肠杆菌感受态细胞的热激转化方法第23页
    · 酶切鉴定阳性重组质粒第23-24页
    · DNA测序鉴定重组质粒第24页
    · SDS-PAGE检测脯氨酸 4-羟化酶的表达第24页
    · 重组菌反式4羟脯氨酸积累量的测定第24-25页
  · 反式4羟脯氨酸生产菌株的摇瓶发酵条件优化方法第25-27页
    · 重组大肠杆菌生长曲线的绘制第25页
    · 重组大肠杆菌发酵曲线的绘制第25页
    · 单因素优化方法第25-26页
    · 正交实验方法第26页
    · 优化后重组菌反式4羟脯氨酸积累量的测定第26-27页
第三章 结果与讨论第27-44页
  · 高产L-脯氨酸重组大肠杆菌的构建及检测第27-31页
    · 大肠杆菌BL21(DE3)基因组的提取第27页
    · proBA基因片段的获得第27-28页
    · 含有野生型目的基因proBA的重组质粒的构建第28-29页
    · DNA测序鉴定点突变重组质粒第29页
    · 在重组质粒上插入色氨酸串联启动子第29-30页
    · SDS-PAGE结果分析第30-31页
    · 重组菌L-脯氨酸积累量的检测第31页
  · 产反式4羟脯氨酸重组大肠杆菌的构建及检测第31-36页
    · 共表达载体的构建及验证第31-34页
    · DNA测序鉴定重组质粒第34页
    · SDS-PAGE结果分析第34-35页
    · 重组菌反式4羟脯氨酸积累量的测定第35-36页
  · 产反式4羟脯氨酸重组大肠杆菌的摇瓶发酵条件优化第36-44页
    · 重组大肠杆菌生长曲线的绘制第36-37页
    · 重组大肠杆菌发酵曲线的绘制第37-38页
    · 单因素优化第38-42页
    · 正交实验结果第42页
    · 优化后重组菌反式4羟脯氨酸积累量的测定第42-44页
主要结论与展望第44-45页
  主要结论第44页
  展望第44-45页
致谢第45-46页
参考文献第46-49页
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文第49页

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