论文目录 | |
| 中文摘要 | 第11-17页 |
| ABSTRACT | 第17-21页 |
| 第一章 文献综述 | 第21-35页 |
| 1.1 杆状病毒 | 第21-25页 |
| 1.1.1 杆状病毒概述 | 第21页 |
| 1.1.2 杆状病毒的分类以及生活史 | 第21-23页 |
| 1.1.3 昆虫杆状病毒表达载体系统 | 第23页 |
| 1.1.4 重组杆状病毒的研究进展 | 第23-25页 |
| 1.2 病毒感染与DNA损伤应答 | 第25页 |
| 1.3 杆状病毒与宿主的凋亡相关基因 | 第25-29页 |
| 1.3.1 细胞凋亡 | 第25-26页 |
| 1.3.2 杆状病毒p35基因 | 第26-27页 |
| 1.3.3 杆状病毒iaps基因 | 第27-28页 |
| 1.3.4 草地贪夜蛾Sfp53基因 | 第28-29页 |
| 1.4 杆状病毒囊膜融合蛋白GP64 | 第29-30页 |
| 1.5 蝎神经毒素 | 第30-32页 |
| 1.5.1 蝎神经毒素概述 | 第30-31页 |
| 1.5.2 蝎毒素的分类及作用 | 第31页 |
| 1.5.3 东亚钳蝎神经毒素 | 第31-32页 |
| 1.6 论文设计思路 | 第32-35页 |
| 1.6.1 研究内容 | 第32页 |
| 1.6.2 研究方法 | 第32-33页 |
| 1.6.3 实验方案 | 第33-34页 |
| 1.6.4 研究创新点 | 第34-35页 |
| 第二章 重组杆状病毒AcMNPV-p35-EGFP和AcMNPV-gp64-EGFP的构建 | 第35-46页 |
| 2.1 引言 | 第35页 |
| 2.2 实验材料 | 第35-36页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第35页 |
| 2.2.2 主要生化试剂 | 第35-36页 |
| 2.2.3 菌株与细胞 | 第36页 |
| 2.2.4 主要试剂的配制 | 第36页 |
| 2.3 实验方法 | 第36-42页 |
| 2.3.1 重组质粒pFastBacDual-p35-EGFP与pFastBacDual-gp64-EGFP的构建 | 第36-40页 |
| 2.3.2 转座重组获得杆粒Bacmid-p35-EGFP与Bacmid-gp64-EGFP | 第40-41页 |
| 2.3.3 昆虫Sf9细胞的培养 | 第41页 |
| 2.3.4 重组杆粒Bacmid-p35-EGFP以及Bacmid-gp64-EGFP转染昆虫Sf9细胞 | 第41-42页 |
| 2.3.5 转染上清液感染体外培养的昆虫Sf9细胞 | 第42页 |
| 2.3.6 蚀斑实验 | 第42页 |
| 2.4 实验结果 | 第42-44页 |
| 2.4.1 重组质粒pFastBacDual-p35-EGFP与pFastBacDual-gp64-EGFP的PCR以及酶切鉴定 | 第42-43页 |
| 2.4.2 重组杆粒Bacmid-p35-EGFP与Bacmid-gp64-EGFP的鉴定 | 第43-44页 |
| 2.4.3 重组病毒AcMNPV-p35-EGFP和AcMNPV-gp64-EGFP的获得 | 第44页 |
| 2.4.4 重组病毒AcMNPV-p35-EGFP和AcMNPV-gp64-EGFP的活性鉴定 | 第44页 |
| 2.5 讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 AcMNPV-BmK IT通过调控P35蛋白影响宿主凋亡与病毒增殖之间的互作 | 第46-58页 |
| 3.1 引言 | 第46页 |
| 3.2 实验材料 | 第46-47页 |
| 3.2.1 细胞和病毒 | 第46页 |
| 3.2.2 生化试剂 | 第46页 |
| 3.2.3 主要试剂的配制 | 第46-47页 |
| 3.2.4 实验仪器 | 第47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-50页 |
| 3.3.1 细胞的培养 | 第47页 |
| 3.3.2 Real-time PCR检测AcMNPV凋亡抑制基因p35、囊膜蛋白基因gp64及iap1、iap2的转录水平 | 第47-48页 |
| 3.3.3 Western blot检测在AcMNPV-p35-EGFP侵染的Sf9细胞中P35-EGFP和SfP53的表达 | 第48-49页 |
| 3.3.4 病毒粒子滴度检测 | 第49页 |
| 3.3.5 Western blot检测在AcMNPV-p35-EGFP侵染的Sf9细胞中 γ-H2AX的表达情况 | 第49-50页 |
| 3.4.实验结果 | 第50-55页 |
| 3.4.1 AcMNPV-BmK IT可上调抗凋亡基因p35的转录水平 | 第50页 |
| 3.4.2 Sf9细胞总RNA的提取与分析 | 第50-51页 |
| 3.4.3 AcMNPV-p35-EGFP侵染Sf9细胞能够延缓SfP53的下调 | 第51-53页 |
| 3.4.4 AcMNPV-p35-EGFP侵染Sf9细胞引发较强的DNA损伤应答反应 | 第53-54页 |
| 3.4.5 过表达P35促进gp64转录和子代病毒的生成 | 第54-55页 |
| 3.4.6 过表达P35更有利于iap1转录水平的提高 | 第55页 |
| 3.5 讨论 | 第55-58页 |
| 第四章 AcMNPV-BmK IT可调控P35下游蛋白GP64的表达促进病毒增殖 | 第58-65页 |
| 4.1.引言 | 第58页 |
| 4.2 实验材料 | 第58页 |
| 4.2.1 细胞和病毒 | 第58页 |
| 4.2.2 生化试剂 | 第58页 |
| 4.2.3 主要试剂的配制 | 第58页 |
| 4.2.4 主要仪器 | 第58页 |
| 4.3 实验方法 | 第58-60页 |
| 4.3.1 细胞的培养 | 第58-59页 |
| 4.3.2 制片 | 第59页 |
| 4.3.3 Western blot检 测在AcMNPV-gp64-EGFP侵 染的Sf9细 胞中GP64-EGFP的表达 | 第59-60页 |
| 4.3.4 病毒粒子滴度测定 | 第60页 |
| 4.4 实验结果 | 第60-63页 |
| 4.4.1 过表达GP64促进子代病毒的生成 | 第60页 |
| 4.4.2 重组病毒AcMNPV-BmK IT(IE1，PH，P10)侵染Sf9细胞后，对GP64蛋白定位的分析 | 第60-61页 |
| 4.4.3 重组病毒AcMNPV-BmK IT(IE1，PH，P10)侵染Sf9细胞后，促进子代病毒的生成 | 第61-63页 |
| 4.5 讨论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-75页 |
| 总结与展望 | 第75-77页 |
| 附录 | 第77-80页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 个人简况及联系方式 | 第82-83页 |
