论文目录 | |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词 | 第7-10页 |
| 第一部分 携带CTTNBP2NL基因的重组腺病毒的抗癌研究 | 第10-56页 |
| 1.1 引言 | 第10-15页 |
| 1.1.1 癌症的现状 | 第10页 |
| 1.1.2 肿瘤基因治疗的研究进展 | 第10-12页 |
| 1.1.3 癌症的靶向基因-病毒治疗研究 | 第12-13页 |
| 1.1.4 腺病毒概述 | 第13-14页 |
| 1.1.5 CTTNBP2NL的概况及研究现状 | 第14-15页 |
| 1.1.6 本课题的研究目的和意义 | 第15页 |
| 1.2 实验材料与方法 | 第15-39页 |
| 1.2.1 实验材料 | 第15-20页 |
| 1.2.1.1 实验主要质粒、菌株及细胞系 | 第15-16页 |
| 1.2.1.2 主要生化试剂 | 第16-17页 |
| 1.2.1.3 主要试剂配制 | 第17-18页 |
| 1.2.1.4 主要仪器 | 第18-19页 |
| 1.2.1.5 引物合成及抗体 | 第19-20页 |
| 1.2.2 分子实验 | 第20-28页 |
| 1.2.2.1 分子实验常用实验方法 | 第20-24页 |
| 1.2.2.2 pCA13-CTTNBP2NL的构建 | 第24-26页 |
| 1.2.2.3 质粒pShuttle-CTTNBP2NL的构建 | 第26-28页 |
| 1.2.3 细胞实验 | 第28-30页 |
| 1.2.4 病毒实验 | 第30-39页 |
| 1.2.4.1 腺病毒的包装 | 第30页 |
| 1.2.4.2 腺病毒的鉴定 | 第30-31页 |
| 1.2.4.3 腺病毒小量扩增及纯化 | 第31-33页 |
| 1.2.4.4 腺病毒大量扩增及CsCl梯度离心纯化病毒 | 第33页 |
| 1.2.4.5 腺病毒滴度的测定（参照上海生博腺病毒滴度检测试剂盒） | 第33-34页 |
| 1.2.4.6 MTT检测Ad-CTTNBP2NL对不同细胞系的增殖抑制率 | 第34-35页 |
| 1.2.4.7 结晶紫染色进行细胞毒性的检测 | 第35页 |
| 1.2.4.8 利用Hochest33258染色观察癌细胞的凋亡 | 第35-36页 |
| 1.2.4.9 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第36页 |
| 1.2.4.10 瞬时转染p EGFP-LC3-C1到癌细胞中检测细胞是否自噬 | 第36-37页 |
| 1.2.4.11 Western blot实验检测细胞内相关蛋白的表达水平 | 第37-39页 |
| 1.2.5 统计学分析 | 第39页 |
| 1.3 实验结果 | 第39-54页 |
| 1.3.1 腺病毒包装过程的鉴定结果 | 第39-43页 |
| 1.3.1.1 重组质粒pEGFP-CTTNBP2NL-C1的鉴定 | 第39-40页 |
| 1.3.1.2 重组质粒pCA13-Flag-CTTNBP2NL的鉴定 | 第40-41页 |
| 1.3.1.3 重组质粒pShuttle-CTTNBP2NL的鉴定 | 第41页 |
| 1.3.1.4 重组质粒pAd-CTTNBP2NL的鉴定 | 第41-42页 |
| 1.3.1.5 重组质粒pAd-CTTNBP2NL转化到DH 5ɑ中的鉴定 | 第42-43页 |
| 1.3.1.6 重组质粒pAD-CTTNBP2NL用PacI酶切线性化 | 第43页 |
| 1.3.2 腺病毒的鉴定 | 第43-45页 |
| 1.3.2.1 Ad-CTTNBP2NL腺病毒目的基因的鉴定 | 第43-44页 |
| 1.3.2.2 Ad-CTTNBP2NL腺病毒野毒的鉴定 | 第44-45页 |
| 1.3.3 MTT法检测重组病毒对恶性肿瘤的杀伤能力 | 第45-47页 |
| 1.3.4 结晶紫染色分析重组腺病毒对癌细胞的影响 | 第47-48页 |
| 1.3.5 Hoechst33258染色检测重组腺病毒对癌细胞的凋亡诱导作用 | 第48-50页 |
| 1.3.6 流式细胞术检测Ad-CTTNBP2NL对癌细胞凋亡的影响 | 第50-51页 |
| 1.3.7 癌细胞转染pEGFP-LC3-C1检测Ad-CTTNBP2NL是否引起自噬 | 第51-53页 |
| 1.3.8 Western blot检测相关蛋白 | 第53-54页 |
| 1.4 讨论 | 第54-55页 |
| 1.5 结论 | 第55-56页 |
| 第二部分 外源性凝集素UPL1对癌细胞中多种信号通路影响的研究 | 第56-66页 |
| 2.1 引言 | 第56-57页 |
| 2.2 实验材料和方法 | 第57-59页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第57页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第57-59页 |
| 2.2.2.1 免疫共沉淀检测与UPL1相互作用的蛋白 | 第57-58页 |
| 2.2.2.2 激光共聚焦观察UPL1与MEP50WD的共定位 | 第58页 |
| 2.2.2.3 Western blot检测相关信号通路中关键蛋白的表达 | 第58页 |
| 2.2.2.4 MTT检测用不同抑制剂处理后UPL1对细胞存活率的影响 | 第58-59页 |
| 2.3 实验结果 | 第59-64页 |
| 2.3.1 免疫共沉淀检测与UPL1结合的蛋白 | 第59页 |
| 2.3.2 激光共聚焦显微镜观察UPL1与MEP50WD的共定位 | 第59-60页 |
| 2.3.3 Western blot检测信号通路中相关蛋白的表达 | 第60-62页 |
| 2.3.3.1 Western blot检测ERK、AKT、p38信号通路等相关蛋白 | 第60-61页 |
| 2.3.3.2 Western blot检测细胞自噬的相关蛋白 | 第61-62页 |
| 2.3.4 MTT检测饥饿诱导后细胞存活率 | 第62-63页 |
| 2.3.5 Ad-UPL1和MEK、p38、PI3K信号通路抑制剂的联合作用 | 第63-64页 |
| 2.3.6 Western blot检测UPL1与抑制剂联合处理后相关蛋白的表达 | 第64页 |
| 2.4 讨论 | 第64-65页 |
| 2.5 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 硕士期间学术成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
