核酸酶P1在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达、纯化及活性分析
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核酸酶P1在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达、纯化及活性分析
论文目录
摘要
第1-6页
ABSTRACT
第6-11页
第一章 文献综述
第11-25页
· 核酸酶 P1 的研究进展
第11-18页
· 核酸酶
第11-16页
· 核酸酶 P1 的发展历程及应用
第16-18页
· 毕赤酵母表达系统
第18-22页
· 启动子
第19-20页
· 标签
第20-21页
· 分泌型蛋白的翻译后修饰
第21-22页
· 分泌信号
第21页
· 二硫键形成
第21页
· O-或 N-链接的糖基化
第21-22页
· 重叠延伸 PCR 技术的发展及应用
第22-23页
· 立题依据和研究目的
第23-25页
第二章 核酸酶 P1 的原核表达、纯化及活性分析
第25-43页
· 材料
第25-30页
· 质粒载体
第25页
· 宿主菌
第25页
· 实验材料及试剂盒
第25页
· 实验试剂
第25-28页
· 培养基
第28-29页
· 主要仪器
第29页
· 引物
第29-30页
· 实验方法
第30-34页
· NP1 基因的拼接
第30页
· 原核表达载体的构建
第30-33页
· 感受态细胞制备
第33页
· 重组 NP1 酶活力检测及表达条件优化
第33页
· 重组 NP1 的纯化与酶活性电泳检测
第33-34页
· 重组 NP1 的热稳定性
第34页
· 重组 NP1 的金属离子依赖性
第34页
· 结果分析
第34-41页
· NP1 基因的人工合成
第34页
· 原核表达载体的构建
第34-36页
· 重组 NP1 的表达及表达条件优化
第36-37页
· 重组 NP1 的纯化与酶活性电泳检测
第37-40页
· 重组 NP1 的热稳定性
第40-41页
· 重组 NP1 的金属离子依赖性
第41页
· 讨论
第41-43页
第三章 核酸酶 P1 在毕赤酵母中的表达及活性分析
第43-58页
· 材料
第43-47页
· 质粒载体
第43页
· 宿主菌
第43页
· 实验材料及试剂盒
第43页
· 实验试剂
第43-45页
· 毕赤酵母培养基配方
第45-46页
· 主要仪器
第46页
· 引物
第46-47页
· 实验方法
第47-50页
· 重组载体的构建
第47-48页
· 重组载体电转化及阳性重组子的筛选
第48-49页
· 重组载体的线性化
第48页
· 毕赤酵母感受态细胞的制备及转化
第48-49页
· 阳性重组子的筛选
第49页
· 阳性重组子的鉴定
第49页
· 基因组 DNA 的提取
第49页
· 基因组 DNA PCR 鉴定
第49页
· 重组蛋白表达条件的优化及酶活性测定
第49-50页
· 重组蛋白的初步纯化
第50页
· 酶活性凝胶电泳检测
第50页
· 结果与分析
第50-56页
· 重组表达载体 pPIC9K-NP1-His 和 pPIC9K-MF-pre-NP1 构建
第50-51页
· 重组载体电转化及毕赤酵母阳性重组子的筛选
第51-53页
· 菌株的筛选和表达条件的优化
第53-55页
· 重组 NP1 的初步纯化
第55-56页
· 酶活性凝胶电泳检测
第56页
· 讨论
第56-58页
第四章 结论与创新点
第58-59页
· 结论
第58页
· 创新点
第58-59页
参考文献
第59-66页
附录
第66-67页
缩略词
第67-69页
致谢
第69-70页
作者简介
第70页
本篇论文共
70
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