论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7
页 |
| Abstract | 第7-14
页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-29
页 |
| 1 文昌鱼 | 第14-21
页 |
| · 文昌鱼概述 | 第14-18
页 |
| · 文昌鱼是分子发育进化生物学模式动物 | 第18-19
页 |
| · 文昌鱼的分子生物学研究 | 第19-21
页 |
| · 文昌鱼基因的克隆 | 第19
页 |
| · 文昌鱼与比较基因组学和进化 | 第19-21
页 |
| 2 抗凝血酶研究进展 | 第21-27
页 |
| · AT 的蛋白质结构 | 第22-23
页 |
| · AT 与肝素的结合 | 第23-24
页 |
| · AT 的RCL 结构中心 | 第24-25
页 |
| · AT 的合成及水解失活 | 第25
页 |
| · AT 的基因结构及体外表达 | 第25-26
页 |
| · AT 的分类与进化 | 第26-27
页 |
| 3 研究目的和技术路线 | 第27-29
页 |
| 第二章 BBAT 基因全长的克隆及序列分析 | 第29-48
页 |
| 1 前言 | 第29
页 |
| 2 材料与方法 | 第29-38
页 |
| · 材料和试剂 | 第29-30
页 |
| · 成体文昌鱼 | 第29
页 |
| · 实验试剂及配制方法 | 第29-30
页 |
| · 实验方法 | 第30-38
页 |
| · 文昌鱼总RNA 的分离 | 第30-31
页 |
| · BbAT 基因全长的克隆 | 第31-37
页 |
| · 序列比较与系统进化分析 | 第37
页 |
| · 结构预测 | 第37-38
页 |
| 3 结果与讨论 | 第38-48
页 |
| · 文昌鱼总RNA 的提取 | 第38
页 |
| · BbAT 的序列和结构 | 第38-47
页 |
| · BbAT 基因保守片段的PCR 扩增 | 第38-39
页 |
| · 3’RACE 扩增文昌鱼BbAT 基因的3’cDNA 末端 | 第39
页 |
| · 5’RACE 扩增文昌鱼BbAT 基因的5’cDNA 末端 | 第39-40
页 |
| · 序列分析 | 第40-47
页 |
| · 讨论 | 第47-48
页 |
| 第三章 BBAT 基因在文昌鱼成体中的组织表达 | 第48-58
页 |
| 1 前言 | 第48
页 |
| 2 材料与方法 | 第48-54
页 |
| · RNA 探针的合成和标记效率检测 | 第48-51
页 |
| · 切片原位杂交分析BbAT 基因在各组织中的表达 | 第51-54
页 |
| · 文昌鱼材料固定 | 第51-52
页 |
| · 文昌鱼组织块的包埋 | 第52
页 |
| · 载玻片的处理 | 第52
页 |
| · 切片 | 第52
页 |
| · 脱蜡复水 | 第52
页 |
| · 处理及杂交 | 第52-54
页 |
| 3 结果 | 第54-57
页 |
| 4 讨论 | 第57-58
页 |
| 第四章 BBAT 基因的体外重组表达及功能研究 | 第58-86
页 |
| 1 前言 | 第58-59
页 |
| 2 材料与方法 | 第59-77
页 |
| · 多克隆抗体的制备 | 第59-69
页 |
| · BbAT 在大肠杆菌中的表达 | 第59-68
页 |
| · 多克隆抗体的制备 | 第68
页 |
| · 抗体的特异性的Western blot 检测 | 第68-69
页 |
| · BbAT 基因的毕赤酵母表达 | 第69-75
页 |
| · 菌株与质粒 | 第69-70
页 |
| · 酵母表达和纯化中的培养基和主要试剂的配制 | 第70-71
页 |
| · pPICZαA/BbAT 真核表达载体的构建及鉴定 | 第71
页 |
| · 毕赤酵母的电转化 | 第71-74
页 |
| · BbAT 在毕赤酵母中的表达和纯化 | 第74-75
页 |
| · 发色底物法检测rBbAT 活性 | 第75-76
页 |
| · BbAT-目标酶复合物检测 | 第76-77
页 |
| · 样品与试剂 | 第76
页 |
| · 方法 | 第76-77
页 |
| 3 结果与讨论 | 第77-86
页 |
| · 多克隆抗体的制备 | 第77-79
页 |
| · BbAT 基因ORF 的PCR 扩增 | 第77
页 |
| · pET28a-BbAT 表达载体的构建 | 第77-78
页 |
| · 重组pET28a-BbAT 在大肠杆菌中的表达、纯化 | 第78-79
页 |
| · 多克隆抗体制备及Western blot 检测 | 第79
页 |
| · BbAT 在酵母中的表达 | 第79-83
页 |
| · 载体的构建和鉴定 | 第79-80
页 |
| · Mut+的鉴定 | 第80-81
页 |
| · 重组蛋白的表达和纯化 | 第81-83
页 |
| · 发色底物法检测rBbAT 活性 | 第83-84
页 |
| · BbAT-目标酶复合物的检测 | 第84-86
页 |
| 总结与展望 | 第86-88
页 |
| 参考文献 | 第88-94
页 |
| 致谢 | 第94-95
页 |
| 作者简介 | 第95
页 |
| 发表的学术论文 | 第95
页 |
