论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文縮略表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-18页 |
| 1.1 ALV-J分子生物学研究进展 | 第13-15页 |
| 1.1.1 ALV的分类 | 第13页 |
| 1.1.2 ALV-J病原学及其理化特性 | 第13-14页 |
| 1.1.3 ALV-J病毒基因结构及其编码蛋白 | 第14-15页 |
| 1.2 ALV-J的流行病学研究概况 | 第15-16页 |
| 1.2.1 ALV-J的流行病学 | 第15页 |
| 1.2.2 ALV-J的诊断 | 第15-16页 |
| 1.2.3 ALV-J的防治 | 第16页 |
| 1.3 ALV-J的致瘤机理 | 第16-17页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第17-18页 |
| 第二章 ALV-J SD1009/SD1009△19前病毒cDNA感染性克隆的构建及病毒拯救 | 第18-28页 |
| 2.1 材料 | 第18页 |
| 2.1.1 病毒、细胞、载体和菌种 | 第18页 |
| 2.1.2 试剂和仪器 | 第18页 |
| 2.2 SD1009株前病毒cDNA感染性克隆的构建 | 第18-21页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第19页 |
| 2.2.2 模板制备与PCR扩增 | 第19页 |
| 2.2.3 SD1009株前病毒cDNA克隆的构建 | 第19-20页 |
| 2.2.4 pBlu-SD1009重组质粒序列分析 | 第20-21页 |
| 2.3 SD1009株前病毒cDNA 5'UTR缺失19nt感染性克隆的构建 | 第21-22页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第21页 |
| 2.3.2 模板制备与PCR扩增 | 第21页 |
| 2.3.3 SD1009前病毒cDNA 5'UTR缺失19nt克隆的构建 | 第21-22页 |
| 2.3.4 pBlu-SD1009△19重组质粒序列分析 | 第22页 |
| 2.4 细胞转染及病毒拯救 | 第22页 |
| 2.5 拯救病毒检测 | 第22-23页 |
| 2.5.1 间接免疫荧光试验 | 第22页 |
| 2.5.2 电镜检测 | 第22-23页 |
| 2.6 结果 | 第23-26页 |
| 2.6.1 SD1009株前病毒cDNA感染性克隆pBlu-SD1009的构建 | 第23-24页 |
| 2.6.2 SD1009前病毒cDNA缺失19nt克隆感染性克隆pBlu-SD1009△19的构建 | 第24-25页 |
| 2.6.3 拯救病毒的鉴定结果 | 第25-26页 |
| 2.7 讨论 | 第26-28页 |
| 第三章 蛋鸡ALV-J 5'UTR 19nt的插入对病毒体外复制影响的实验 | 第28-36页 |
| 3.1 实验材料 | 第28页 |
| 3.1.1 载体、菌株和细胞 | 第28页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 | 第28页 |
| 3.2 报告基因检测rSD1009、rSD1009△19和HRPS-103三株病毒前导序列的增强子活性 | 第28-31页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第28-29页 |
| 3.2.2 模板制备与PCR扩增 | 第29页 |
| 3.2.3 PCR扩增产物的纯化回收 | 第29页 |
| 3.2.4 连接 | 第29页 |
| 3.2.5 转化 | 第29-30页 |
| 3.2.6 阳性菌落的筛选及培养 | 第30页 |
| 3.2.7 重组子质粒DNA的提取 | 第30页 |
| 3.2.8 重组子质粒的测序鉴定 | 第30页 |
| 3.2.9 构建含rSD1009、rSD1009△19和HRPS-103三株病毒前导序列的荧光素酶表达载体 | 第30页 |
| 3.2.10 重组质粒的荧光素酶报告基因活性检测 | 第30-31页 |
| 3.3 rSD1009、rSD1009△19和HRPS-103三株病毒反转录酶活性的测定 | 第31页 |
| 3.4 rSD1009、rSD1009△19和HRPS-103三株病毒滴度的测定 | 第31页 |
| 3.5 结果 | 第31-34页 |
| 3.5.1 rSD1009、rSD1009A19和HRPS-103三株病毒前导序列DNA片段增强子活性的检测 | 第31-33页 |
| 3.5.2 rSD1009、rSD1009A 19和HRPS-103三株病毒的反转录酶活性 | 第33页 |
| 3.5.3 rSD1009、rSD1009△19和HRPS-103三株病毒的滴度 | 第33-34页 |
| 3.6 讨论 | 第34-36页 |
| 第四章 蛋鸡ALV-J 5'UTR 19nt的插入对病毒体内复制和致病力影响的实验 | 第36-40页 |
| 4.1 病毒 | 第36页 |
| 4.2 实验设计 | 第36页 |
| 4.3 中和抗体的检测 | 第36-37页 |
| 4.4 临床症状及病理变化观察 | 第37页 |
| 4.6 结果 | 第37-39页 |
| 4.6.1 SPF蛋鸡ALV-J 5'UTR插入19nt对ALV-J体内复制能力没有影响 | 第37页 |
| 4.6.2 蛋鸡ALV-J 5'UTR插入19nt对ALV-J致病力没有影响 | 第37-39页 |
| 4.7 讨论 | 第39-40页 |
| 第五章 全文结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 作者简历 | 第46页 |
