论文目录 | |
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-17页 |
| 1 几丁质 | 第10-11页 |
| 1.1 昆虫外骨骼 | 第10页 |
| 1.2 昆虫几丁质 | 第10-11页 |
| 2 几丁质代谢 | 第11-13页 |
| 2.1 几丁质合成 | 第11-12页 |
| 2.2 几丁质的降解 | 第12-13页 |
| 3 β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶 | 第13-16页 |
| 3.1 β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶的分类及功能 | 第13-15页 |
| 3.2 β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶研究进展 | 第15-16页 |
| 4 斜纹夜蛾 | 第16页 |
| 5 本研究的目的与意义 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-44页 |
| 1 实验材料 | 第17-20页 |
| 1.1 供试昆虫 | 第17页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第17-18页 |
| 1.3 主要实验试剂及耗材 | 第18-20页 |
| 2 实验方法 | 第20-44页 |
| 2.1 常用实验试剂及培养基的配制 | 第20-23页 |
| 2.2 斜纹夜蛾 β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因克隆 | 第23-30页 |
| 2.2.1 Trizol抽提斜纹夜蛾总RNA | 第23-24页 |
| 2.2.2 纯化斜纹夜蛾mRNA | 第24-25页 |
| 2.2.3 制备斜纹夜蛾Marathon cDNA | 第25-26页 |
| 2.2.4 SlNAGs基因的克隆及 5’-RACE和 3’-RACE | 第26-30页 |
| 2.3 斜纹夜蛾 β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶序列分析 | 第30-31页 |
| 2.3.1 β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因结构分析 | 第30页 |
| 2.3.2 β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶系统发育分析 | 第30-31页 |
| 2.4 斜纹夜蛾 β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因表达量分析 | 第31-32页 |
| 2.4.1 cDNA第一链的合成 | 第31页 |
| 2.4.2 引物有效性分析 | 第31-32页 |
| 2.4.3 不同发育时期不同组织表达量分析 | 第32页 |
| 2.5 RNAi分析 | 第32-35页 |
| 2.5.1 dsRNA引物设计 | 第32-33页 |
| 2.5.2 dsRNA的合成及检测 | 第33-35页 |
| 2.5.3 dsRNA的注射 | 第35页 |
| 2.5.4 RNAi结果检测及表型观察 | 第35页 |
| 2.6 斜纹夜蛾 β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因的真核表达 | 第35-44页 |
| 2.6.1 细胞培养基的配制及Sf9细胞传代 | 第35-36页 |
| 2.6.2 构建重组pBavAK8-SlNAGs质粒 | 第36-38页 |
| 2.6.3 重组蛋白在昆虫杆状病毒中的表达 | 第38-39页 |
| 2.6.4 重组蛋白扩增 | 第39页 |
| 2.6.5 重组蛋白纯化 | 第39-40页 |
| 2.6.6 重组蛋白脱盐 | 第40页 |
| 2.6.7 重组蛋白SDS-PAGE鉴定 | 第40-41页 |
| 2.6.8 Western-Blotting | 第41-42页 |
| 2.6.9 重组蛋白浓度测定 | 第42-43页 |
| 2.6.10 重组蛋白酶活测定 | 第43-44页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第44-56页 |
| 1 实验结果 | 第44-53页 |
| 1.1 斜纹夜蛾 β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因克隆 | 第44-45页 |
| 1.2 斜纹夜蛾 β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因序列分析 | 第45-46页 |
| 1.3 斜纹夜蛾 β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因的结构域分析 | 第46页 |
| 1.4 斜纹夜蛾 β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶时空表达谱分析 | 第46-48页 |
| 1.5 蜕皮激素对斜纹夜蛾 β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶表达量影响 | 第48-49页 |
| 1.6 斜纹夜蛾 β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶RNAi分析 | 第49-51页 |
| 1.7 斜纹夜蛾 β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶在昆虫杆状系统表达 | 第51-52页 |
| 1.8 斜纹夜蛾重组 β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶蛋白活性测定 | 第52-53页 |
| 2 讨论 | 第53-56页 |
| 第四章 论文总结 | 第56-58页 |
| 1 本论文主要研究结果 | 第56-57页 |
| 2 展望 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 攻读硕士期间论文发表情况 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
