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北方玉米丝轴黑粉菌的遗传多样性评价及GFP基因在病理学研究中的应用
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北方玉米丝轴黑粉菌的遗传多样性评价及GFP基因在病理学研究中的应用
论文目录
 
摘要第1-10 页
Abstract第10-12 页
部分缩略语表第12-13 页
前言第13-23 页
　　1 玉米丝黑穗病的研究进展第13-16 页
　　　　· 玉米丝黑穗病的分布与危害第13 页
　　　　　　· 玉米丝黑穗病在我国的分布第13 页
　　　　　　· 玉米丝黑穗病的危害第13 页
　　　　· 玉米丝黑穗病病原菌的生理小种分化第13-14 页
　　　　· 玉米丝黑穗病的症状与鉴定方法第14-16 页
　　　　　　· 症状第14-15 页
　　　　　　· 鉴定方法第15-16 页
　　　　· 玉米丝黑穗病病原菌的侵染机制研究第16 页
　　2 随机扩增多态性DNA(RAPD)研究进展第16-18 页
　　　　· RAPD技术简介第16-17 页
　　　　· RAPD技术在真菌研究中的应用第17-18 页
　　3 真菌的遗传转化研究进展第18-20 页
　　　　· 根癌农杆菌介导的真菌的遗传转化第18-19 页
　　　　　　· 根癌农杆菌介导转化真菌的分子生物学原理第18 页
　　　　　　· 影响转化的因素第18-19 页
　　　　　　· 根癌农杆菌介导的遗传转化在真菌中的应用第19 页
　　　　· 真菌的原生质体转化第19-20 页
　　　　　　· 影响原生质体转化的因素第19-20 页
　　　　　　· 原生质体转化在真菌中的应用第20 页
　　4 绿色荧光蛋白(GFP)作为生物标记在病原真菌中的应用第20-21 页
　　5 本课题研究的目的和意义第21-23 页
第一章 北方玉米丝轴黑粉菌的遗传多样性研究第23-36 页
　　1 材料与方法第23-27 页
　　　　· 材料第23 页
　　　　· 方法第23-27 页
　　　　　　· 玉米丝轴黑粉菌的分离第23-24 页
　　　　　　· DNA的提取及纯化第24-25 页
　　　　　　· DNA的检测第25 页
　　　　　　· PCR反应第25-26 页
　　　　　　· 电泳检测和数据处理第26-27 页
　　2 结果与分析第27-33 页
　　　　· 玉米丝轴黑粉菌的特异引物检测第27 页
　　　　· 丝轴黑粉菌的遗传多态性分析第27-28 页
　　　　· 种群间遗传距离和遗传相似性第28 页
　　　　· 种群间遗传分化第28-30 页
　　　　· 基因流的影响第30 页
　　　　· 种群和个体间遗传聚类关系第30-32 页
　　　　· 主坐标分析第32-33 页
　　3 讨论第33-36 页
第二章 根癌农杆菌介导的玉米丝轴黑粉菌的遗传转化第36-49 页
　　1 材料与方法第36-43 页
　　　　· 材料第36 页
　　　　　　· 质粒载体第36 页
　　　　　　· 菌株第36 页
　　　　· 方法第36-43 页
　　　　　　· 含重组质粒的农杆菌的制备与培养第36-41 页
　　　　　　　　· 高效启动子gpd的扩增第36-37 页
　　　　　　　　· 含高效启动子trpC，gpd的双元载体的构建第37-40 页
　　　　　　　　· 质粒的大肠杆菌转化第40 页
　　　　　　　　· 质粒的提取和鉴定第40-41 页
　　　　　　　　· 质粒的根癌农杆菌转化第41 页
　　　　　　　　· 农杆菌质粒酶切鉴定第41 页
　　　　　　· 根癌农杆菌介导的玉米丝轴黑粉菌的遗传转化第41-43 页
　　　　　　　　· 潮霉素抑制玉米丝轴黑粉菌生长的最低浓度的筛选第41 页
　　　　　　　　· 根癌农杆菌介导的玉米丝轴黑粉菌的转化第41-42 页
　　　　　　　　· 转化子的PCR鉴定第42 页
　　　　　　　　· 用于转化的根癌农杆菌最佳菌株的筛选第42 页
　　　　　　　　· 用于转化的丝轴黑粉菌担孢子最佳成熟度的筛选第42 页
　　　　　　　　· 用于转化的根癌农杆菌最佳浓度的筛选第42-43 页
　　2 结果与分析第43-47 页
　　　　· 扩增GPD启动子序列测序结果分析第43 页
　　　　· 含trpC启动子载体的构建及鉴定第43-44 页
　　　　· 潮霉素抑制玉米丝轴黑粉菌生长的最低浓度的筛选第44 页
　　　　· 转化子的潮霉素筛选第44-45 页
　　　　· 转化子的PCR鉴定第45 页
　　　　· 用于转化的根癌农杆菌最佳菌株的筛选第45-46 页
　　　　· 用于转化的丝轴黑粉菌担孢子最佳成熟度的筛选第46 页
　　　　· 用于转化的根癌农杆菌最佳浓度的筛选第46-47 页
　　3 讨论第47-49 页
第三章 转化GFP菌株侵染玉米第49-55 页
　　1 材料与方法第49-51 页
　　　　· 材料第49 页
　　　　　　· 植物材料第49 页
　　　　　　· 菌株第49 页
　　　　· 方法第49-51 页
　　　　　　· 植物材料的准备第49 页
　　　　　　· 转化菌株配对第49-50 页
　　　　　　· 二眯基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察第50 页
　　　　　　· 幼苗期接种第50 页
　　　　　　· 苗期PCR检测第50 页
　　　　　　· 成熟期冬孢子检测第50 页
　　　　　　· 切片制备第50 页
　　　　　　· 普通显微镜镜检第50-51 页
　　　　　　· 荧光共聚焦显微镜(LSCM)观察第51 页
　　2 结果与分析第51-53 页
　　　　· DAPI染色观察第51 页
　　　　· 幼苗期PCR检测第51-52 页
　　　　· 玉米成熟期田间取样观察结果第52 页
　　　　· 切片普通显微镜镜检结果第52 页
　　　　· 切片荧光共聚焦显微镜镜检第52-53 页
　　3 讨论第53-55 页
总结第55-60 页
参考文献第60-66 页
致谢第66-67 页
附录1 试剂和培养基制备第67-69 页
附录2 大肠杆菌电转化感受态的制备第69-70 页
附录3 质粒的大肠杆菌转化第70 页
附录4 根癌农杆菌感受态的制备第70-71 页
附录5 质粒的根癌农杆菌转化第71 页
附录6 凝胶回收DNA片段(TaKaRa)第71-72 页
附录7 碱裂解法提取质粒(小样法)第72-73 页
附录8 大样法抽提高浓度质粒第73 页
附录9 用苯酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)进行DNA样品的纯化第73-74 页
附录10 PCR产物的纯化第74 页
附录11 克隆gpd序列比对结果第74-78 页

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