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香蕉多酚氧化酶的基因克隆及原核表达
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香蕉多酚氧化酶的基因克隆及原核表达
论文目录
 
摘要第1-6页
ABSTRACT第6-11页
1 引言第11-19页
　　· 香蕉多酚氧化酶研究进展第11-15页
　　　　· 香蕉PPO的分离纯化第11-12页
　　　　· 香蕉PPO酶学特性第12-14页
　　　　　　· 香蕉PPO的属性第12页
　　　　　　· 温度、pH对香蕉PPO活性和稳定性的影响第12-13页
　　　　　　· 底物对香蕉PPO活性的影响第13页
　　　　　　· 香蕉PPO活性的变化规律第13-14页
　　　　· 香蕉PPO活性的控制第14-15页
　　　　　　· 物理方法控制香蕉PPO活性第14页
　　　　　　· 化学方法控制香蕉PPO活性第14-15页
　　　　· 香蕉PPO的抗病性及其应用第15页
　　　　· 香蕉PPO基因的研究第15页
　　· 电子克隆技术研究现状第15-19页
　　　　· 电子克隆的原理第16页
　　　　· 电子克隆的实施方案第16-17页
　　　　　　· 基于EST数据库的电子克隆第16页
　　　　　　· 基于基因组数据库的电子克隆第16-17页
　　　　· 原核表达研究进展第17页
　　　　· 本研究目的和意义第17-18页
　　　　· 本研究技术路线第18-19页
2 材料与方法第19-36页
　　· 实验材料与设备第19-23页
　　　　· 实验样品第19页
　　　　· 菌株和质粒第19页
　　　　· 主要仪器与设备第19页
　　　　· 试剂盒、工具酶及主要生化试剂第19-20页
　　　　· 常规培养基及溶液的配制第20-23页
　　· 实验方法第23-36页
　　　　· 香蕉果肉总RNA提取条件优化第23-25页
　　　　　　· RNA常规提取方法第23页
　　　　　　· RNA提取条件优化第23-24页
　　　　　　· RNA完整性分析第24页
　　　　　　· RNA纯度及含量检测第24页
　　　　　　· RNA提取方法验证第24页
　　　　　　· RT-PCR分析第24-25页
　　　　· 电子克隆香蕉PPO基因第25页
　　　　· 电子克隆基因的PCR扩增验证第25-27页
　　　　　　· 特异性引物设计与合成第25页
　　　　　　· 香蕉PPO基因PCR扩增第25页
　　　　　　· PCR产物目的片段回收纯化第25-26页
　　　　　　· 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备第26页
　　　　　　· PCR产物与T载体的连接第26页
　　　　　　· 连接产物转化第26-27页
　　　　　　· 菌液PCR鉴定第27页
　　　　　　· 香蕉PPO基因测序第27页
　　　　　　· 香蕉PPO基因测序结果分析第27页
　　　　· 香蕉PPO的生物信息学分析第27-28页
　　　　　　· 香蕉PPO基因同源性分析及进化树图谱的构建第27页
　　　　　　· 香蕉PPO的亚细胞定位第27页
　　　　　　· 香蕉PPO信号肽预测和分析第27页
　　　　　　· 香蕉PPO的跨膜预测第27-28页
　　　　　　· 香蕉PPO结构域分析及功能预测第28页
　　　　　　· 香蕉PPO氨基酸理化性质分析第28页
　　　　　　· 香蕉PPO亲水性/疏水性分析第28页
　　　　　　· 蛋白质二级及三级结构的预测第28页
　　　　· 香蕉PPO原核表达载体构建第28-32页
　　　　　　· 带酶切位点PCR引物合成第28页
　　　　　　· 重组PPO基因克隆第28-29页
　　　　　　· 双酶切pMD19-T-PPO及载体第29-30页
　　　　　　· 酶切产物纯化第30页
　　　　　　· 目的基因与表达载体的连接第30-31页
　　　　　　· 连接产物转化第31页
　　　　　　· 菌液PCR鉴定第31页
　　　　　　· 双酶切验证第31-32页
　　　　　　· 阳性克隆测序比对分析第32页
　　　　· 香蕉PPO原核诱导表达第32-36页
　　　　　　· 宿主菌感受态细胞的制备第32页
　　　　　　· 重组质粒转化至宿主菌第32-33页
　　　　　　· 香蕉PPO在大肠杆菌中的诱导表达第33页
　　　　　　· 表达产物包涵体含量分析第33-34页
　　　　　　· 表达产物SDS-PAGE分析第34-35页
　　　　　　· 包涵体变性复性第35页
　　　　　　· 表达产物酶活性分析第35页
　　　　　　· 表达产物蛋白质含量分析第35页
　　　　　　· 包涵体纯化第35页
　　　　　　· 重组蛋白质质谱鉴定第35-36页
3 结果与分析第36-74页
　　· 香蕉果肉总RNA提取条件优化第36-44页
　　　　· 提取缓冲液对RNA提取质量和得率的影响第36页
　　　　· 缓冲液pH和离子浓度对RNA提取质量和得率的影响第36-38页
　　　　· CaCl_2浓度、处理温度和处理时间对RNA提取质量和得率的影响第38-40页
　　　　· LiCl沉淀时间对RNA提取质量和得率的影响第40页
　　　　· 异丙醇简化RNA沉淀第40-41页
　　　　· 香蕉果肉总RNA优化提取方法验证第41-44页
　　· 电子克隆香蕉PPO基因第44-50页
　　· 电子克隆香蕉PPO基因验证第50-56页
　　　　· 香蕉PPO基因的PCR扩增第50页
　　　　· 香蕉PPO基因的PCR产物克隆与鉴定第50-52页
　　　　· 香蕉PPO基因的PCR产物测序结果分析第52-56页
　　　　　　· 香蕉PPO阅读框架分析第52-55页
　　　　　　· BXPPO1与NBPPO2序列比对第55-56页
　　· 香蕉PPO基因的生物信息学分析第56-61页
　　　　· 香蕉PPO基因同源性分析及进化树图谱的构建第56-57页
　　　　· 香蕉PPO的亚细胞定位第57页
　　　　· 香蕉PPO信号肽和转运肽的预测和分析第57-58页
　　　　· 香蕉PPO的跨膜螺旋预测第58页
　　　　· 香蕉PPO结构域分析及功能预测第58-59页
　　　　· 香蕉PPO氨基酸理化性质分析第59-60页
　　　　· 香蕉PPO亲水性/疏水性分析第60页
　　　　· 蛋白质二级及三级结构的预测第60-61页
　　· 香蕉PPO原核表达载体构建第61-66页
　　　　· 带酶切位点PCR引物合成第61-62页
　　　　· 重组PPO基因克隆第62-63页
　　　　· 表达载体构建第63-66页
　　　　· 阳性克隆测序及比对分析第66页
　　· 香蕉PPO原核诱导表达第66-74页
　　　　· 不同IPTG浓度对蛋白表达的影响第66-68页
　　　　· 不同诱导时间对蛋白表达的影响第68-70页
　　　　· 不同Cu~(2+)浓度对蛋白表达的影响第70页
　　　　· 不同培养基对蛋白表达的影响第70-71页
　　　　· 表达产物包涵体含量分析第71-72页
　　　　· 包涵体变性复性第72页
　　　　· 包涵体纯化第72页
　　　　· 蛋白质测序验证第72-74页
4 讨论第74-77页
　　· 香蕉果肉总RNA提取的优化第74页
　　· 电子克隆香蕉PPO基因第74-75页
　　· 香蕉PPO的原核诱导表达第75-77页
5 结论第77-78页
参考文献第78-87页
缩略词表第87-88页
附录第88-92页
致谢第92页

本篇论文共92页，点击这进入下载页面。
 
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