论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6
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| Abstract | 第6-13
页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-20
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| · LEA 蛋白研究进展 | 第13-16
页 |
| · LEA 蛋白的分类和特点 | 第13-14
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| · LEA 蛋白的结构 | 第14
页 |
| · LEA 蛋白的亚细胞定位 | 第14-16
页 |
| · LEA 蛋白编码基因的表达调控 | 第16-17
页 |
| · 基因表达和调节 | 第16
页 |
| · LEA 蛋白编码基因的启动子研究 | 第16-17
页 |
| · LEA 蛋白的功能 | 第17-18
页 |
| · 参与蛋白稳定和分子保护 | 第17-18
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| · 参与离子结合和抗氧化作用 | 第18
页 |
| · 参与细胞膜连接、折叠和稳定作用 | 第18
页 |
| · 前景展望 | 第18
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| · 本研究的目的和意义 | 第18-20
页 |
| 第二章 紫花苜蓿 MsLEA3-1 基因的克隆 | 第20-26
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| · 材料 | 第20
页 |
| · 植物材料 | 第20
页 |
| · 菌株和试剂 | 第20
页 |
| · 引物设计与合成 | 第20
页 |
| · 方法 | 第20-23
页 |
| · 获取材料 | 第20
页 |
| · 紫花苜蓿总RNA 的提取 | 第20-21
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| · 逆转录合成第一链cDNA | 第21
页 |
| · PCR 反应 | 第21
页 |
| · PCR 产物的切胶回收 | 第21
页 |
| · PCR 产物的 T-A 克隆 | 第21-22
页 |
| · 连接产物的转化 | 第22
页 |
| · 挑取阳性克隆 | 第22
页 |
| · 鉴定与分析 | 第22-23
页 |
| · 结果与分析 | 第23-24
页 |
| · 提取紫花苜蓿总RNA | 第23
页 |
| · pMD-Lea PCR 鉴定 | 第23-24
页 |
| · MsLEA3-1 基因的序列分析 | 第24
页 |
| · 讨论 | 第24-26
页 |
| 第三章 MsLEA3-1 基因的表达分析 | 第26-30
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| · 实验仪器 | 第26
页 |
| · 方法 | 第26-27
页 |
| · 引物设计 | 第26
页 |
| · 材料的获取 | 第26
页 |
| · 实时荧光定量检测MsLEA3-1 基因 | 第26-27
页 |
| · 结果与分析 | 第27-28
页 |
| · MsLEA3-1 基因的组织差异性表达 | 第27
页 |
| · 不同时间NaCl 胁迫下MsLEA3-1 基因的变化 | 第27-28
页 |
| · 不同时间ABA 胁迫下MsLEA3-1 基因的变化 | 第28
页 |
| · 讨论 | 第28-30
页 |
| 第四章 MsLEA3-1 原核表达及亚细胞定位 | 第30-39
页 |
| · 材料 | 第30-31
页 |
| · 菌株 | 第30
页 |
| · 质粒载体 | 第30
页 |
| · 引物设计 | 第30
页 |
| · 主要试剂 | 第30
页 |
| · 溶液配制 | 第30-31
页 |
| · 方法 | 第31-34
页 |
| · 重组子pET-LEA 构建 | 第31
页 |
| · 重组子GFP-LEA 构建 | 第31
页 |
| · 重组子pET-LEA 对E.coli 的转化 | 第31-32
页 |
| · 重组质粒的鉴定 | 第32
页 |
| · 诱导表达重组子pET-LEA | 第32
页 |
| · 金粉的制备 | 第32
页 |
| · DNA 子弹的制备 | 第32-33
页 |
| · 洋葱表皮的准备 | 第33
页 |
| · 洋葱表皮的轰击及检测 | 第33-34
页 |
| · 结果与分析 | 第34-39
页 |
| · MsLEA3-1 基因原核表达载体pET-LEA 构建及鉴定 | 第34-35
页 |
| · MsLEA3-1 基因融合蛋白诱导表达 | 第35-36
页 |
| · MsLEA3-1 基因亚细胞定位表达载体构建及鉴定 | 第36
页 |
| · 洋葱表皮细胞的轰击及荧光信号的检测 | 第36-39
页 |
| 第五章 MsLEA3-1 基因超表达载体的构建及转化 | 第39-48
页 |
| · 材料 | 第39-40
页 |
| · 植物材料 | 第39
页 |
| · 菌株和载体 | 第39
页 |
| · 试剂材料 | 第39
页 |
| · 溶液配制 | 第39
页 |
| · 培养基的配制 | 第39-40
页 |
| · 方法 | 第40-41
页 |
| · 引物设计 | 第40
页 |
| · 植物表达载体构建 | 第40
页 |
| · 农杆菌感受态的制备 | 第40
页 |
| · 农杆菌的转化和阳性克隆的鉴定 | 第40
页 |
| · 烟草和紫花苜蓿的转化 | 第40
页 |
| · 再生植株的转基因检测 | 第40-41
页 |
| · 结果与分析 | 第41-46
页 |
| · 植物表达载体构建 | 第41-42
页 |
| · 重组子的鉴定 | 第42-43
页 |
| · 烟草再生植株的获得 | 第43
页 |
| · 苜蓿再生植株的获得 | 第43-44
页 |
| · 苜蓿再生植株PCR 检测 | 第44
页 |
| · 烟草再生植株检测 | 第44-46
页 |
| · 讨论 | 第46-48
页 |
| 第六章 MsLEA3-1 基因ihpRNA 干扰载体构建及对烟草的转化 | 第48-56
页 |
| · 材料 | 第48
页 |
| · 供试材料 | 第48
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| · 培养基 | 第48
页 |
| · 方法 | 第48-50
页 |
| · 引物设计 | 第48-49
页 |
| · MsLEA3-1 基因干扰片段的克隆和测序鉴定 | 第49-50
页 |
| · MsLEA3-1 基因ihpRNA 载体构建及鉴定 | 第50
页 |
| · 农杆菌感受态的制备、转化及鉴定 | 第50
页 |
| · 烟草转化 | 第50
页 |
| · 结果与分析 | 第50-54
页 |
| · RNA 干扰植物表达载体构建及鉴定 | 第50-53
页 |
| · 转基因植株的鉴定 | 第53-54
页 |
| · 讨论 | 第54-56
页 |
| 第七章 转基因烟草的耐盐性评价 | 第56-62
页 |
| · 材料 | 第56
页 |
| · 植物材料 | 第56
页 |
| · 试剂 | 第56
页 |
| · 主要仪器 | 第56
页 |
| · 培养基 | 第56
页 |
| · 方法 | 第56-57
页 |
| · 设计与处理 | 第56-57
页 |
| · 项目测定与方法 | 第57
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| · 结果与分析 | 第57-61
页 |
| · 转MsLEA3-1 基因烟草组培苗的耐盐性 | 第57-59
页 |
| · 转基因烟草盆栽苗的耐盐性 | 第59-61
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| · 讨论 | 第61-62
页 |
| 第八章 结论与展望 | 第62-63
页 |
| · 结论 | 第62
页 |
| · 展望 | 第62-63
页 |
| 参考文献 | 第63-70
页 |
| 致谢 | 第70-71
页 |
| 作者简历 | 第71页 |
