论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-19页 |
| 1.1 阿维菌素简介 | 第10页 |
| 1.2 阿维菌素的生物活性和作用机制 | 第10-12页 |
| 1.2.1 阿维菌素的生物活性 | 第10-11页 |
| 1.2.2 阿维菌素的作用机制 | 第11-12页 |
| 1.3 阿维链霉菌的阿维菌素合成基因 | 第12-13页 |
| 1.3.1 中心区4个阅读框架为聚酮合成酶基因 | 第12-13页 |
| 1.3.2 两套PKS基因之间的2个开放阅读框架 | 第13页 |
| 1.3.3 PKS基因右侧的9个开放阅读框架 | 第13页 |
| 1.3.4 PKS基因左侧的3个开放阅读框架 | 第13页 |
| 1.4 阿维菌素生物合成途径 | 第13-14页 |
| 1.5 阿维菌素生物合成的调控 | 第14-15页 |
| 1.6 阿维菌素分子结构与活性关系 | 第15页 |
| 1.6.1 游离羟基对活性的影响 | 第15页 |
| 1.6.2 竹桃糖C3'-O-甲基及C3"-O-甲基对活性的影响 | 第15页 |
| 1.6.3 取代糖数目对活性的影响 | 第15页 |
| 1.7 阿维菌素衍生物和结构修饰 | 第15-16页 |
| 1.8 阿维链霉菌的基因改造 | 第16-18页 |
| 1.8.1 选择性产生阿维菌素B_(la)和B_(2a) | 第16页 |
| 1.8.2 aveR基因失活提高阿维菌素产量 | 第16页 |
| 1.8.3 选择性产生阿维菌素B_2与B_1的比例降低的菌株 | 第16-17页 |
| 1.8.4 寡霉素生物合成的阻断 | 第17页 |
| 1.8.5 C25位上的修饰 | 第17页 |
| 1.8.6 阿维菌素B_(2a)的选择性产出 | 第17-18页 |
| 1.9 研究内容与意义 | 第18-19页 |
| 1.9.1 本课题研究内容 | 第18页 |
| 1.9.2 本课题研究意义 | 第18-19页 |
| 第2章 带有aveD缺失基因的重组质粒pHD3的构建 | 第19-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 菌种 | 第19页 |
| 2.1.2 质粒 | 第19页 |
| 2.1.3 培养基 | 第19页 |
| 2.1.4 试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.5 抗生素 | 第20页 |
| 2.1.6 工具酶及其他试剂 | 第20页 |
| 2.1.7 主要仪器 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-23页 |
| 2.2.1 阿维链霉菌基因组DNA的提取 | 第20页 |
| 2.2.2 PCR扩增 | 第20-21页 |
| 2.2.3 大肠杆菌感受态细胞的制备与质粒转化感受态细胞 | 第21页 |
| 2.2.4 重组质粒的β-半乳糖苷酶系统(蓝白斑)筛选 | 第21-22页 |
| 2.2.5 大肠杆菌质粒DNA的少量提取 | 第22页 |
| 2.2.6 Cracking法快速鉴定重组转化子 | 第22页 |
| 2.2.7 DNA酶切、酶切片段回收与连接 | 第22-23页 |
| 2.2.8 含aveD’重组穿梭质粒pHD3的构建方法 | 第23页 |
| 2.3 实验结果 | 第23-31页 |
| 2.3.1 aveD基因扩增、测序 | 第23-24页 |
| 2.3.2 质粒pHD2的构建 | 第24-25页 |
| 2.3.3 aveD基因与质粒pHD2中插入的aveD'基因测序 | 第25-27页 |
| 2.3.4 质粒pKC1139的酶切鉴定 | 第27页 |
| 2.3.5 带有aveD'片段的重组质粒pHD3的构建 | 第27-28页 |
| 2.3.6 重组质粒转化大肠杆菌转化子筛选阳性克隆 | 第28页 |
| 2.3.7 重组质粒pHD3中aveD'基因的序列测定 | 第28-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31页 |
| 2.5 小结 | 第31-32页 |
| 第3章 aveD基因缺失突变株的筛选 | 第32-44页 |
| 3.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 菌种 | 第32页 |
| 3.1.2 培养基 | 第32-33页 |
| 3.1.3 缓冲液及试剂 | 第33页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-36页 |
| 3.2.1 维链霉菌原生质体的制备 | 第33-34页 |
| 3.2.2 链霉菌原生质体的转化与再生 | 第34页 |
| 3.2.3 转化子双交换株的筛选与验证 | 第34-35页 |
| 3.2.4 链霉菌总DNA的少量提取 | 第35-36页 |
| 3.2.5 双交换突变株基因组DNA中aveD的PCR扩增 | 第36页 |
| 3.2.6 双交换突变株基因组DNA中aveD的PCR扩增产物的测序 | 第36页 |
| 3.3 实验结果 | 第36-43页 |
| 3.3.1 阿维链霉菌原生质体的制备与再生 | 第36-37页 |
| 3.3.2 阿维链霉菌原生质体的再生 | 第37页 |
| 3.3.3 转化子在再生培养基上的菌落形态 | 第37-38页 |
| 3.3.4 受体菌与单交换突变体菌落形态观察 | 第38页 |
| 3.3.5 阿维链霉菌单交换突变体菌丝体形态的观察 | 第38-39页 |
| 3.3.6 阿维链霉菌双交换突变体菌落形态观察 | 第39-40页 |
| 3.3.7 双交换突变株aveD基因扩增及测序 | 第40-43页 |
| 3.4 小结 | 第43-44页 |
| 总结 | 第44-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 致谢 | 第49页 |
