论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5
页 |
| Abstract | 第5-11
页 |
| 引言 | 第11-13
页 |
| 1 文献综述 | 第13-31
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| · 引言 | 第13
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| · 肌红蛋白的结构 | 第13-15
页 |
| · 肌红蛋白结构和功能研究的现状 | 第15-20
页 |
| · 氨基酸选择性突变 | 第16-17
页 |
| · 血红素化学修饰 | 第17
页 |
| · 氨基酸选择突变和血红素修饰相结合 | 第17-18
页 |
| · 非天然辅基引入 | 第18-19
页 |
| · 电极上的直接电化学 | 第19-20
页 |
| · 与小分子或金属离子的相互作用 | 第20
页 |
| · PCR定点突变 | 第20-22
页 |
| · 利用PCR在基因的5'或3'末端产生突变 | 第21
页 |
| · 利用重叠延伸PCR技术在基因的中心区段产生取代突变 | 第21-22
页 |
| · 蛋白的分离纯化方法 | 第22-23
页 |
| · 凝胶过滤层析(GC) | 第22
页 |
| · 离子交换层析(IEC) | 第22-23
页 |
| · 疏水作用层析(HIC) | 第23
页 |
| · 金属离子亲和层析(IMAC) | 第23
页 |
| · 蛋白质结构的研究方法 | 第23-30
页 |
| · 圆二色性光谱法 | 第24-27
页 |
| · 荧光光谱 | 第27-28
页 |
| · 紫外-可见吸收光谱 | 第28
页 |
| · 核磁共振法 | 第28-29
页 |
| · X射线衍射结构分析法 | 第29-30
页 |
| · 本论文的工作 | 第30-31
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| 2 突变体Mb(D60K)的构建 | 第31-41
页 |
| · 引言 | 第31
页 |
| · 实验材料 | 第31-32
页 |
| · 实验仪器 | 第31
页 |
| · 实验试剂 | 第31
页 |
| · 培养基和储备液 | 第31-32
页 |
| · 引物的设计与合成 | 第32
页 |
| · 实验方法 | 第32-38
页 |
| · 质粒提取 | 第32-33
页 |
| · PCR定点突变 | 第33-35
页 |
| · PCR产物的回收 | 第35
页 |
| · 酶切载体和目的基因 | 第35-36
页 |
| · 酶切反应物的精制 | 第36
页 |
| · 载体与目的基因的连接 | 第36
页 |
| · 感受态细胞的制备 | 第36-37
页 |
| · 转化 | 第37
页 |
| · 阳性克隆的筛选 | 第37-38
页 |
| · DNA测序 | 第38
页 |
| · 结果与讨论 | 第38-40
页 |
| · 小结 | 第40-41
页 |
| 3 突变体Mb(D60K)的表达、分离与纯化 | 第41-45
页 |
| · 引言 | 第41
页 |
| · 实验材料 | 第41
页 |
| · 实验仪器 | 第41
页 |
| · 实验试剂及缓冲液 | 第41
页 |
| · 实验方法 | 第41-43
页 |
| · 蛋白质的表达 | 第41-42
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| · 总蛋白溶液的获取 | 第42
页 |
| · 总蛋白的粗提 | 第42
页 |
| · 肌红蛋白的精制 | 第42-43
页 |
| · 肌红蛋白浓度的测定 | 第43-44
页 |
| · 结果与讨论 | 第44
页 |
| · 小结 | 第44-45
页 |
| 4 肌红蛋白及其突变体(D60K)结构稳定性的研究 | 第45-51
页 |
| · 引言 | 第45
页 |
| · 实验材料 | 第45
页 |
| · 实验仪器 | 第45
页 |
| · 实验试剂 | 第45
页 |
| · 实验方法 | 第45-46
页 |
| · 热诱导的Mb(WT)和Mb(D60K)的去折叠研究 | 第45
页 |
| · pH介导的Mb(WT)和Mb(D60K)的去折叠研究 | 第45-46
页 |
| · 盐酸胍诱导的Mb(WT)和Mb(D60K)的去折叠研究 | 第46
页 |
| · 结果与讨论 | 第46-50
页 |
| · 热诱导的Mb(WT)和Mb(D60K)的去折叠研究 | 第46-48
页 |
| · pH介导的Mb(WT)和Mb(D60K)的去折叠研究 | 第48-49
页 |
| · 盐酸胍诱导的Mb(WT)和Mb(D60K)的去折叠研究 | 第49-50
页 |
| · 小结 | 第50-51
页 |
| 5 肌红蛋白突变体(D60K)与Cu~(2+)相互作用的研究 | 第51-61
页 |
| · 引言 | 第51
页 |
| · 实验材料 | 第51-52
页 |
| · 实验仪器 | 第51-52
页 |
| · 实验试剂 | 第52
页 |
| · 实验方法 | 第52
页 |
| · 紫外-可见吸收光谱的测定 | 第52
页 |
| · 荧光光谱的测定 | 第52
页 |
| · 同步荧光光谱测定 | 第52
页 |
| · 圆二色光谱的测定 | 第52
页 |
| · 结果与讨论 | 第52-60
页 |
| · 紫外-可见吸收光谱 | 第52-53
页 |
| · 荧光光谱 | 第53-58
页 |
| · 同步荧光光谱 | 第58-59
页 |
| · 圆二色光谱 | 第59-60
页 |
| · 小结 | 第60-61
页 |
| 6 肌红蛋白及其突变体(D60K)过氧化物酶活性的研究 | 第61-67
页 |
| · 引言 | 第61-62
页 |
| · 实验材料 | 第62
页 |
| · 实验仪器 | 第62
页 |
| · 实验试剂 | 第62
页 |
| · 实验方法 | 第62-63
页 |
| · 对愈创木酚Km值的测定 | 第62
页 |
| · Mb(WT)及Mb(D60K)过氧化物酶的最适温度和热稳定性 | 第62
页 |
| · Mb(WT)及Mb(D60K)过氧化物酶的最适pH和pH稳定性 | 第62-63
页 |
| · 结果与讨论 | 第63-66
页 |
| · 对愈创木酚Km值的测定 | 第63
页 |
| · Mb(WT)及Mb(D60K)过氧化物酶的最适温度和热稳定性 | 第63-65
页 |
| · Mb(WT)及Mb(D60K)过氧化物酶的最适pH和pH稳定性 | 第65-66
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| · 小结 | 第66-67
页 |
| 7 结论与展望 | 第67-69
页 |
| · 结论 | 第67
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| · 创新点 | 第67-68
页 |
| · 展望 | 第68-69
页 |
| 参考文献 | 第69-75
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| 附录 缩略语表 | 第75-76
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| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第76-77
页 |
| 致谢 | 第77-78
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