论文目录 | |
摘要 | 第1-9页 |
Abstract | 第9-11页 |
缩略词表(Abbreviation) | 第11-12页 |
1 文献综述 | 第12-20页 |
· 副猪嗜血杆菌病概述 | 第12页 |
· 副猪嗜血杆菌致病机理 | 第12-13页 |
· 副猪嗜血杆菌生长与铁源的利用 | 第13-15页 |
· 副猪嗜血杆菌生长影响因素 | 第14页 |
· 铁的摄取过程 | 第14-15页 |
· 二硫键(DSB)系统概述 | 第15-16页 |
· 二硫键氧化还原酶研究进展 | 第16-19页 |
· 二硫键氧化还原酶同系物研究进展 | 第17-18页 |
· 二硫键氧化还原酶与细菌致病力研究进展 | 第18-19页 |
· 小结与展望 | 第19-20页 |
2 研究目的与意义 | 第20-21页 |
3 材料和方法 | 第21-40页 |
· 实验材料 | 第21-26页 |
· 菌株、质粒载体 | 第21页 |
· 酶、试剂、试剂盒 | 第21页 |
· 主要细菌培养基及抗生素的配制 | 第21-22页 |
· 主要溶液的配制 | 第22-24页 |
· 引物 | 第24-26页 |
· 实验方法 | 第26-40页 |
· dsbA同源重组质粒的构建 | 第26-29页 |
· 自然转化筛选 ΔdsbA缺失株 | 第29-31页 |
· C-dsbA1互补质粒的构建 | 第31页 |
· ΔdsbA缺失株和C-dsbA1互补菌株的鉴定 | 第31-34页 |
· 铜敏感实验 | 第34页 |
· 胰岛素还原实验 | 第34-38页 |
· DTT敏感实验 | 第38页 |
· SH0165、ΔdsbA和C-dsbA1生长曲线的测定 | 第38页 |
· 扫描电镜观察SH0165和 ΔdsbA1菌体形态 | 第38-39页 |
· 铁螯合生长实验 | 第39页 |
· 血清抗性实验 | 第39-40页 |
4 结果和分析 | 第40-53页 |
· dsbA同源重组质粒的构建 | 第40-41页 |
· ΔdsbA缺失株的鉴定 | 第41-43页 |
· ΔdsbA缺失株PCR鉴定 | 第41-42页 |
· RT-PCR验证 ΔdsbA缺失株 | 第42-43页 |
· Southern blot验证 ΔdsbA1缺失株 | 第43页 |
· dsbA1互补菌株的构建和鉴定 | 第43-44页 |
· pSHK3-C-dsbA1质粒的构建 | 第43-44页 |
· SH0165-C-dsbA1互补菌株的鉴定 | 第44页 |
· DsbA1和DsbA2生化特性分析 | 第44-49页 |
· 铜敏感实验体内检测DsbA的异构酶功能 | 第44-45页 |
· 胰岛素还原实验体外检测DsbA的异构酶功能 | 第45-49页 |
· DTT敏感实验检测DsbA的氧化折叠酶功能 | 第49页 |
· SH0165、ΔdsbA1和C-dsbA1生长曲线的绘制 | 第49-50页 |
· 扫描电镜观察SH0165和 ΔdsbA1菌体形态 | 第50-51页 |
· 铁螯合生长实验 | 第51页 |
· 血清抗性实验 | 第51-53页 |
5 讨论 | 第53-56页 |
· SH0165中dsbA缺失株的成功构建 | 第53页 |
· DsbA生化特性初步揭示两者的蛋白功能 | 第53-54页 |
· dsbA1缺失显著影响SH0165的生长 | 第54-55页 |
· dsbA1缺失影响铁的利用 | 第55页 |
· dsbA1与血清抗性有关 | 第55-56页 |
6 结论 | 第56-57页 |
参考文献 | 第57-65页 |
附录 | 第65-66页 |
致谢 | 第66页 |