论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-18页 |
| 1.1 裂解多糖单加氧酶（lyticpolysaccharidemonooxygenases，LPMO） | 第11-13页 |
| 1.1.1 裂解多糖单加氧酶的催化结构 | 第12页 |
| 1.1.2 裂解多糖单加氧酶的催化底物 | 第12页 |
| 1.1.3 裂解多糖单加氧酶的催化特性 | 第12-13页 |
| 1.2 P.anserina的简介 | 第13-15页 |
| 1.2.1 P.anserina的生活史 | 第13-15页 |
| 1.3 Split-Marker方法 | 第15-16页 |
| 1.4 研究目的及主要内容 | 第16-18页 |
| 1.4.1 研究目的 | 第16页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第16-18页 |
| 第2章 材料和方法 | 第18-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-25页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第18-19页 |
| 2.1.2 实验试剂及常用溶液配制 | 第19-21页 |
| 2.1.3 实验培养基 | 第21页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.5 生化试剂、试剂盒与酶 | 第22-23页 |
| 2.1.6 寡聚核苷酸引物 | 第23-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-41页 |
| 2.2.1 基本实验方法 | 第25-28页 |
| 2.2.2 表达盒的构建方法 | 第28-31页 |
| 2.2.3 P.anserina突变株的获得 | 第31-34页 |
| 2.2.4 Southernblotting验证LPMO基因敲除突变体 | 第34-37页 |
| 2.2.5 多重突变体的构建 | 第37页 |
| 2.2.6 LPMO系统发育树的构建 | 第37-38页 |
| 2.2.7 裂解多糖单加氧酶酶活的测定 | 第38-39页 |
| 2.2.8 对木质纤维素的降解 | 第39-40页 |
| 2.2.9 对木聚糖和木糖的降解 | 第40页 |
| 2.2.10 对于氧化应激的敏感性测试 | 第40-41页 |
| 第3章 结果与分析 | 第41-66页 |
| 3.1 P.anserina的lpmo敲除表达盒的构建 | 第41-46页 |
| 3.1.1 P.anserina基因组DNA的提取 | 第41页 |
| 3.1.2 P.anserina裂解多糖单加氧酶基因的上下游片段与选择标记基因的扩增与分析 | 第41-43页 |
| 3.1.3 敲除表达盒的构建 | 第43-46页 |
| 3.1.4 获得大肠杆菌阳性转化子 | 第46页 |
| 3.2 P.anserina突变株的转化与鉴定 | 第46-50页 |
| 3.2.1 P.anserina原生质体的转化 | 第46-47页 |
| 3.2.2 P.anserina突变株的鉴定 | 第47-49页 |
| 3.2.3 Southernblot验证 | 第49-50页 |
| 3.3 P.anserina中lpmo基因的鉴定及系统发育分析 | 第50-52页 |
| 3.4 在LPMO突变体中羧甲基纤维素酶活力（CMCA）降低 | 第52-54页 |
| 3.5 P.anserina野生型与突变菌株的表型分析 | 第54-66页 |
| 3.5.1 野生型与突变菌株在标准M2培养基上生长情况—LPMOs参与到P.anserina的生长和发育过程中 | 第54-55页 |
| 3.5.2 LPMO涉及到木质素基或纤维素材料的降解 | 第55-63页 |
| 3.5.3 对木聚糖和木糖的降解 | 第63-65页 |
| 3.5.4 LPMO和氧化应激 | 第65-66页 |
| 第4章 讨论 | 第66-71页 |
| 4.1 融合片段的获得 | 第66页 |
| 4.2 抗性标记基因的选择 | 第66-67页 |
| 4.3 P.anserina原生质体的转化 | 第67-68页 |
| 4.4 裂解多糖单加氧酶活性与羧甲基纤维素钠酶活性的分析 | 第68-69页 |
| 4.5 表型分析 | 第69页 |
| 4.6 对木聚糖和木糖的降解 | 第69-70页 |
| 4.7 系统发育树分析 | 第70页 |
| 4.8 创新点及展望 | 第70-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第79页 |
