论文目录 | |
| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 第一部分 乳铁蛋白相关研究进展 | 第14-27页 |
| 第一节 乳铁蛋白(LF)研究 | 第14-20页 |
| 1.乳铁蛋白(LF)及其活性多肽结构 | 第14页 |
| 2.乳铁蛋白的生物学功能和作用机理 | 第14-19页 |
| · 促进肠道细胞对铁离子的吸收 | 第14-15页 |
| · 抗菌作用 | 第15-16页 |
| · 抑菌作用 | 第15页 |
| · 杀菌作用 | 第15-16页 |
| · 抗病毒作用 | 第16-17页 |
| · 抗氧化作用 | 第17页 |
| · 调节机体免疫功能 | 第17-18页 |
| · 抗感染作用 | 第18-19页 |
| · 其它的相关作用 | 第19页 |
| 3.研究LF结构的意义 | 第19页 |
| 4.乳铁蛋白及其小肽的国内外研究动态 | 第19-20页 |
| 第二节 乳铁蛋白(LF)基因重组表达研究 | 第20-21页 |
| 第三节 PICHIA METHANOLICA甲醇营养型酵母表达系统 | 第21-26页 |
| 1.P.methanolica系统的特点 | 第21-22页 |
| 2.P.methanolica的甲醇代谢机理 | 第22页 |
| 3.P.methanolica系统的表达宿主菌 | 第22-23页 |
| 4.P.methanolica的表达载体 | 第23页 |
| 5.表达载体与宿主菌的转化与整合 | 第23-24页 |
| 6.蛋白翻译后加工 | 第24页 |
| 7.利用P.methanolica系统表达外源基因的一般步骤 | 第24-25页 |
| 8.P.methanolica酵母的蛋白质分拣和区域化 | 第25页 |
| 9.P.methanolica表达系统的特点和应用前景 | 第25-26页 |
| 第四节 本文的研究目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二部分 研究内容 | 第27-62页 |
| 第一章 重组乳铁蛋白菌株摇瓶发酵条件研究 | 第27-45页 |
| 1.试验材料 | 第27-28页 |
| · 试验出发菌株 | 第27页 |
| · 培养基 | 第27页 |
| · YPD固体培养基 | 第27页 |
| · 种子培养基 | 第27页 |
| · 发酵基础培养基 | 第27页 |
| · 主要试剂和仪器 | 第27-28页 |
| · 培养基中使用的主要试剂 | 第27页 |
| · 主要仪器 | 第27-28页 |
| 2.试验方法与设计 | 第28-30页 |
| · 发酵培养方法 | 第28页 |
| · 种子活化方法 | 第28页 |
| · 摇瓶种子培养 | 第28页 |
| · 重组菌株发酵研究 | 第28页 |
| · 效价测定 | 第28页 |
| · 菌体浓度测定 | 第28页 |
| · 目的蛋白表达量SDS-PAGE分析 | 第28页 |
| · 发酵原料处理 | 第28-29页 |
| · 发酵碳源酸法水解处理 | 第28-29页 |
| · 发酵氮源酸法水解处理 | 第29页 |
| · 摇瓶发酵试验设计 | 第29-30页 |
| · 接种种龄及诱导表达时间确定 | 第29页 |
| · 单因素优化试验 | 第29页 |
| · 培养基正交优化试验 | 第29-30页 |
| · 初始pH对菌体生长和目的蛋白表达量的影响 | 第30页 |
| · 接种量对菌体生长和目的蛋白表达量的影响 | 第30页 |
| · 摇瓶最佳发酵条件下目的蛋白定量检测 | 第30页 |
| 3.结果与讨论 | 第30-43页 |
| · 接种种龄确定 | 第30-31页 |
| · 重组菌株诱导表达时间关系 | 第31-32页 |
| · 发酵培养基单因素优化试验 | 第32-38页 |
| · 不同碳源对重组菌体生长和目的蛋白表达量的影响 | 第32-34页 |
| · 不同氮源对重组菌体生长和目的蛋白表达量的影响 | 第34-35页 |
| · 不同浓度马铃薯淀粉对菌体生长和目的蛋白表达的影响 | 第35-36页 |
| · 不同C/N对菌体生长和目的蛋白表达的影响 | 第36-38页 |
| · 正交优化试验对菌体生长和目的蛋白表达的影响 | 第38-40页 |
| · 不同初始pH对菌体生长和目的蛋白表达的影响 | 第40-41页 |
| · 不同接种量对菌体生长和目的蛋白表达的影响 | 第41-42页 |
| · 摇瓶最佳发酵条件下目的蛋白定量检测 | 第42-43页 |
| 4.结论 | 第43-45页 |
| 第二章 重组乳铁蛋白菌株10L罐发酵工艺研究 | 第45-57页 |
| 1.试验材料 | 第45-46页 |
| · 试验出发菌株 | 第45页 |
| · 培养基 | 第45页 |
| · YPD固体培养基 | 第45页 |
| · 种子培养基 | 第45页 |
| · 发酵基础培养基 | 第45页 |
| · 主要试剂和仪器 | 第45-46页 |
| 2.实验方法 | 第46-48页 |
| · 发酵培养方法 | 第46页 |
| · 种子活化方法 | 第46页 |
| · 摇瓶种子培养 | 第46页 |
| · 10L罐发酵基础条件 | 第46页 |
| · 效价测定 | 第46页 |
| · 菌体浓度测定 | 第46页 |
| · 目的蛋白表达量SDS-PAGE分析 | 第46页 |
| · 发酵液pH、DO(溶氧)测定 | 第46页 |
| · 马铃薯淀粉双酶法水解 | 第46-47页 |
| · 单一条件控制试验 | 第47页 |
| · 分阶段控制和补料试验 | 第47页 |
| · 发酵罐最佳发酵条件下目的蛋白定量检测 | 第47-48页 |
| 3.结果与讨论 | 第48-56页 |
| · 分批发酵条件研究 | 第48-53页 |
| · 不同转速对重组菌体生长和目的蛋白表达的影响 | 第48-50页 |
| · 不同初始pH对重组菌体生长和目的蛋白表达的影响 | 第50-51页 |
| · 不同温度对重组菌体生长和目的蛋白表达的影响 | 第51-53页 |
| · 分阶段控制发酵条件研究 | 第53-54页 |
| · 搅拌转速的分阶段控制 | 第53-54页 |
| · 分批补料培养对菌体生长和目的蛋白表达量的影响 | 第54页 |
| · 10L发酵罐最佳发酵条件下目的蛋白定量检测 | 第54-56页 |
| 4.结论 | 第56-57页 |
| 第三章 10L罐发酵重组表达产物抑菌效果研究 | 第57-62页 |
| 1.材料与方法 | 第57-58页 |
| · 试验材料 | 第57-58页 |
| · 试验菌株 | 第57页 |
| · 抑菌材料 | 第57页 |
| · 培养基 | 第57-58页 |
| · 试验方法 | 第58页 |
| · 发酵产物 | 第58页 |
| · 薄层琼脂糖孔穴扩散法 | 第58页 |
| · 时间动态曲线法 | 第58页 |
| 2.结果与讨论 | 第58-62页 |
| 小结 | 第62页 |
| 创新点 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70
页 |
