论文目录 | |
| 英文缩略词表 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-13页 |
| 英文摘要 | 第13-17页 |
| 引言 | 第17-25页 |
| 参考文献 | 第23-25页 |
| 实验路线总图 | 第25-26页 |
| 第一部分 人源抗VEGFR2 Fab的抗体库构建及筛选 | 第26-61页 |
| 1 材料 | 第26-30页 |
| · 菌株和质粒 | 第26页 |
| · 试剂 | 第26-29页 |
| · 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2 实验流程图 | 第30-32页 |
| 3 实验设计 | 第32-33页 |
| · 内切酶位点选择 | 第32页 |
| · 引物设计 | 第32-33页 |
| 4 实验步骤 | 第33-47页 |
| · 人外周血淋巴细胞的分离 | 第33页 |
| · Trizol试剂提取人外周血淋巴细胞总RNA | 第33-34页 |
| · cDNA的合成 | 第34页 |
| · PCR扩增Fab抗体基因 | 第34-36页 |
| · 轻链抗体基因重组载体的构建 | 第36-39页 |
| · Fab噬菌体抗体库的构建 | 第39-43页 |
| · Fab噬菌体抗体库的筛选 | 第43-47页 |
| 5 结果 | 第47-56页 |
| 6 讨论 | 第56-59页 |
| 7 参考文献 | 第59-60页 |
| 8 小结 | 第60-61页 |
| 第二部分 人源抗VEGFR2 scFab的克隆表达 | 第61-125页 |
| 第一章 人源抗VEGFR2 scFab基因的构建 | 第61-86页 |
| 1 材料 | 第61-65页 |
| · 菌株和质粒 | 第61页 |
| · 试剂 | 第61-63页 |
| · 主要仪器 | 第63-65页 |
| 2 实验流程图 | 第65-66页 |
| 3 实验设计 | 第66-68页 |
| · 连接序列linker的设计 | 第66-67页 |
| · 环式PCR法突变内切酶位点设计 | 第67页 |
| · 用于scFab表达载体构建的引物的设计 | 第67-68页 |
| 4 实验步骤 | 第68-79页 |
| · pGH-linker质粒的制备 | 第68-69页 |
| · 环式PCR突变内切酶位点 | 第69-74页 |
| · △LC和△Fd基因片段的获取 | 第74-75页 |
| · pGH-linker-△LC的构建 | 第75-77页 |
| · pGH-linker-scFab的构建 | 第77-79页 |
| 5 结果 | 第79-82页 |
| 6 讨论 | 第82-84页 |
| 7 参考文献 | 第84-85页 |
| 8 小结 | 第85-86页 |
| 第二章 人源抗VEGFR2 scFab在pET25b(+)-scFab中的表达研究 | 第86-106页 |
| 1 材料 | 第86-91页 |
| · 菌株和质粒 | 第86页 |
| · 试剂 | 第86-89页 |
| · 主要仪器 | 第89-91页 |
| 2 实验流程图 | 第91-92页 |
| 3 实验设计 | 第92页 |
| · 酶切位点的设计 | 第92页 |
| · 表达条件确定的先后顺序设计 | 第92页 |
| 4 实验步骤 | 第92-96页 |
| · pET25b(+)-scFab重组质粒的构建 | 第92-93页 |
| · 表达条件研究 | 第93-96页 |
| 5 结果 | 第96-100页 |
| 6 讨论 | 第100-104页 |
| 7 参考文献 | 第104-105页 |
| 8 小结 | 第105-106页 |
| 第三章 人源抗VEGFR2 scFab在pET32a-HRV3C-scFab中的融合表达研究 | 第106-125页 |
| 1 材料 | 第106-111页 |
| · 菌株和质粒 | 第106页 |
| · 试剂 | 第106-110页 |
| · 主要仪器 | 第110-111页 |
| 2 实验流程图 | 第111-112页 |
| 3 实验设计 | 第112-113页 |
| · HRV3C的设计 | 第112页 |
| · scFab转移酶切位点的设计 | 第112-113页 |
| 4 实验步骤 | 第113-118页 |
| · pGH-HRV3C-scFab重组质粒的构建 | 第113-114页 |
| · pET32a-HRV3C-scFab重组质粒的构建 | 第114-115页 |
| · 表达条件研究 | 第115-118页 |
| 5 结果 | 第118-121页 |
| 6 讨论 | 第121-123页 |
| 7 参考文献 | 第123-124页 |
| 8 小结 | 第124-125页 |
| 第三部分 人源抗VEGFR2 scFab的纯化和特异性检测 | 第125-147页 |
| 1 材料 | 第125-131页 |
| · 菌株和质粒 | 第125页 |
| · 试剂 | 第125-129页 |
| · 主要仪器 | 第129-131页 |
| 2 实验流程图 | 第131-132页 |
| 3 实验设计 | 第132页 |
| · 表达条件设计 | 第132页 |
| · 纯化方案设计 | 第132页 |
| 4 实验步骤 | 第132-138页 |
| · pET32a-HRV3C-scFab优化条件下大量表达 | 第132页 |
| · 使用His·Bind purification Kit纯化蛋白 | 第132-133页 |
| · HRV3C蛋白酶酶解 | 第133-134页 |
| · 凝胶层析纯化 | 第134-135页 |
| · 浓缩和保存 | 第135页 |
| · 抗体活性检测 | 第135-138页 |
| 5 结果 | 第138-144页 |
| 6 讨论 | 第144-145页 |
| 7 参考文献 | 第145-146页 |
| 8 小结 | 第146-147页 |
| 全文总结 | 第147-149页 |
| 综述 | 第149-161页 |
| 参考文献 | 第158-161页 |
| 研究生期间发表的文章 | 第161-162页 |
| 致谢 | 第162
页 |
