论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-8
页 |
| 英文摘要 | 第8-10
页 |
| 前言 | 第10-14
页 |
| 一、材料与方法 | 第14-28
页 |
| 1 材料 | 第14-18
页 |
| · 菌种和质粒 | 第14-15
页 |
| · 腺病毒载体系统 | 第14-15
页 |
| · E.coli DH5α | 第15
页 |
| · pREP4质粒 | 第15
页 |
| · 酶、主要试剂和仪器 | 第15-17
页 |
| · 酶和主要购买试剂 | 第15-16
页 |
| · 自配试剂 | 第16-17
页 |
| · 仪器 | 第17
页 |
| · 细胞、培养基及培养条件 | 第17-18
页 |
| · 人胚胎肾细胞293T | 第17
页 |
| · 人鼻咽癌细胞CNE | 第17
页 |
| · 大肠杆菌BJ5183和E.coli DH5α | 第17-18
页 |
| · 人胃腺癌细胞SGC-7901 | 第18
页 |
| · 抗生素与浓度 | 第18
页 |
| 2 方法 | 第18-28
页 |
| · pREP4上MDA-7的鉴定以及穿梭质粒上MDA-7的搭载构建 | 第18-20
页 |
| · 3S柱离心式质粒小量快速抽提法 | 第18-19
页 |
| · 酶切以及质粒片段的连接 | 第19
页 |
| · 电泳、胶回收 | 第19-20
页 |
| · E.coli DH5α的感受态制作、菌种保存和CaCl_2法转化 | 第20
页 |
| · PCR反应体系 | 第20
页 |
| · pAd-mda7与pAd-GFP质粒的获得 | 第20-25
页 |
| · 质粒碱法抽提 | 第21-22
页 |
| · 超薄琼脂糖凝胶回收 | 第22
页 |
| · 电转化感受态细胞BJ5183的制备以及电转化 | 第22-23
页 |
| · 穿梭质粒pAdTrackCMV与腺病毒骨架质粒AdEasy-1的同源重组 | 第23
页 |
| · 重组病毒质粒的鉴定和保存 | 第23-25
页 |
| · 细胞转染和病毒生产、滴度测定 | 第25-27
页 |
| · 细胞复苏 | 第25
页 |
| · 细胞传代培养 | 第25
页 |
| · 细胞冻存 | 第25-26
页 |
| · 细胞转染 | 第26
页 |
| · 腺病毒的收取 | 第26
页 |
| · 腺病毒滴度测定 | 第26-27
页 |
| · Hoechst33258凋亡染色和流式细胞仪检测 | 第27-28
页 |
| · Hoechst33258凋亡染色 | 第27
页 |
| · 流式细胞仪PI染色检测细胞周期 | 第27-28
页 |
| 二.结果 | 第28-50
页 |
| 1 pREP4上MDA-7基因的鉴定 | 第28-30
页 |
| · MDA-7基因的测序结果 | 第28-30
页 |
| · pREP4上MDA-7的KpnI+XhoI双酶切鉴定结果 | 第30
页 |
| 2 穿梭质粒pAdTrackCMV-mda7的构建 | 第30-31
页 |
| · pAdTrackCMV和pREP4的KpnI+XhoI双酶切结果 | 第30-31
页 |
| · pAdTrackCMV-mda7的双酶切鉴定结果 | 第31
页 |
| 3 重组病毒质粒pAd-mda7和pAd-GFP的构建 | 第31-33
页 |
| · 重组病毒质粒pAd-mda7和pAd-GFP的PacI酶切结果 | 第31-32
页 |
| · 重组病毒质粒pAd-mda7和pAd-GFP的PCR鉴定结果 | 第32-33
页 |
| 4 细胞转染和病毒滴度测定 | 第33-36
页 |
| · 293T的细胞转染 | 第33-34
页 |
| · 293T的二次病毒感染 | 第34
页 |
| · 293T的多次病毒感染 | 第34-35
页 |
| · 病毒滴度测定 | 第35-36
页 |
| 5 人鼻咽癌细胞CNE相关检测结果 | 第36-44
页 |
| · CNE细胞生长形态 | 第36-40
页 |
| · CNE细胞Hoechst染色结果 | 第40
页 |
| · CNE流式细胞仪检测结果 | 第40-44
页 |
| · SubG1期检测结果 | 第40-41
页 |
| · G2/M Block期检测结果 | 第41-44
页 |
| 6 人胃腺癌细胞SGC-7901相关检测结果 | 第44-50
页 |
| · SGC-7901细胞的生长形态 | 第44-48
页 |
| · SGC-7901 Hoechst染色结果 | 第48
页 |
| · SGC-7901流式细胞仪检测结果 | 第48-50
页 |
| 三、讨论 | 第50-54
页 |
| 1、结果分析和实验展望 | 第50-51
页 |
| 2、从实验过程和结果中得到的启示 | 第51-54
页 |
| 四、参考文献 | 第54-58
页 |
| 五、论文发表情况 | 第58-59
页 |
| 六、致谢 | 第59-61
页 |
