论文目录 | |
| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-28页 |
| 1.1 遗传研究的方法和基因敲除 | 第14-19页 |
| 1.1.1 遗传研究方法总述 | 第14-15页 |
| 1.1.2 现代基因敲除技术的先军——ZFNs | 第15-17页 |
| 1.1.3 现代基因敲除技术的典范——TALENs | 第17-18页 |
| 1.1.4 现代基因敲除技术的新宠——RISPR/Cas9 | 第18-19页 |
| 1.2 斑马鱼简介及其研究现状 | 第19-23页 |
| 1.2.1 斑马鱼简介 | 第19页 |
| 1.2.2 斑马鱼的研究现状 | 第19-23页 |
| 1.3 斑马鱼的造血作用 | 第23-28页 |
| 1.3.1 斑马鱼的造血作用之总述 | 第23-25页 |
| 1.3.2 由实时成像技术发现斑马鱼中HSC的产生过程 | 第25-28页 |
| 第二章 绪论 | 第28-30页 |
| 2.1 本研究工作的目的和意义 | 第28-29页 |
| 2.1.1 利用CRISPR/Cas9系统在斑马鱼中进行基因敲除 | 第28页 |
| 2.1.2 利用转基因系Tg(corola：Kaede)追踪造血干细胞的分化及迁移 | 第28页 |
| 2.1.3 制作血液系统相关转基因斑马鱼品系以期结合转基因系进一步探讨HSPCs的分化去路 | 第28-29页 |
| 2.2 本研究工作的研究内容和预期结果 | 第29-30页 |
| 2.2.1 本研究工作的研究内容 | 第29页 |
| 2.2.2 本研究工作的预期结果 | 第29-30页 |
| 第三章 实验材料与方法 | 第30-60页 |
| 3.1 斑马鱼品系、饲养及其生活史 | 第30-31页 |
| 3.1.1 斑马鱼简介及品系 | 第30页 |
| 3.1.2 斑马鱼的饲养 | 第30-31页 |
| 3.2 实验仪器、试剂以及耗材 | 第31-35页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第31-33页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第33-35页 |
| 3.2.3 实验耗材 | 第35页 |
| 3.3 试剂配制 | 第35-38页 |
| 3.3.1 分子克隆相关 | 第35-37页 |
| 3.3.2 分子生物学实验相关 | 第37-38页 |
| 3.3.3 其他试剂 | 第38页 |
| 3.4 菌株和质粒 | 第38-39页 |
| 3.5 利用MgCl_2法制备E. coli DH5α感受态细胞 | 第39-40页 |
| 3.6 利用CRISPR/Cas9技术制作斑马鱼突变体 | 第40-53页 |
| 3.6.1 针对基因设计CRISPR/Cas9系统工作目标位点 | 第40-41页 |
| 3.6.2 利用pXT7-hCas9制作hCas9 mRNA | 第41-45页 |
| 3.6.3 利用pMD19T-gRNA和PCR制作基因特异的gRNA | 第45-46页 |
| 3.6.4 显微注射 | 第46-47页 |
| 3.6.5 通过测序检测系统瞬时工作效率 | 第47页 |
| 3.6.6 通过T-A末端连接进一步检测工作效率 | 第47-51页 |
| 3.6.7 通过测序从F0代中筛选可遗传突变的个体 | 第51-52页 |
| 3.6.8 通过测序从F1代中筛选稳定遗传的突变个体 | 第52-53页 |
| 3.6.9 通过杂合子自交探究某基因突变体的表型 | 第53页 |
| 3.7 使用Tg(corola：Kaede)短时追踪HSPCs的分裂与分化 | 第53-54页 |
| 3.8 使用tol2系统制作转基因斑马鱼 | 第54-60页 |
| 3.8.1 转座酶mRNA的制备 | 第54-55页 |
| 3.8.2 显微注射 | 第55-56页 |
| 3.8.3 对转基因家系F0代的验证 | 第56-57页 |
| 3.8.4 对转基因家系F1代的验证 | 第57-60页 |
| 第四章 研究结果与分析 | 第60-86页 |
| 4.1 利用CRISPR/Cas9技术进行基因敲除的尝试及规律总结 | 第60-75页 |
| 4.1.1 hCas9 mRNA和gRNA注射剂量的尝试 | 第60-63页 |
| 4.1.2 针对1号染色体上4个基因的敲除实验 | 第63-68页 |
| 4.1.3 对成功和失败的靶点设计案例进行分别的规律总结 | 第68-72页 |
| 4.1.4 应用规律在3个感兴趣基因(GOD中设计靶点的敲除效果 | 第72-75页 |
| 4.2 使用转基因系Tg(corola：Kaede)追踪HSPCs的结果 | 第75-83页 |
| 4.2.1 corola-Kaede可标记HSPCs | 第75-76页 |
| 4.2.2 Kaede蛋白可在高能激光辐照下改变构象 | 第76-77页 |
| 4.2.3 使用光可变荧光蛋白Kaede对CHT产生的HSPCs进行跟踪成像结果 | 第77-80页 |
| 4.2.4 对更多AGM/CHT产生HSPCs的追踪结果 | 第80-83页 |
| 4.3 制作转基因斑马鱼品系Tg(corola：LoxP-BFP-STOP-LoxP-GFP) | 第83-86页 |
| 第五章 结论与建议 | 第86-88页 |
| 5.1 CRISPR/Cas9工作效率可变性的探讨 | 第86-87页 |
| 5.2 CHT发生的HSPCs和AGM区相比的联系和差异 | 第87页 |
| 5.3 转基因品系Tg(corola：LoxP-BFP-STOP-LoxP-GFP)的制作 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-98页 |
| 附录 | 第98-102页 |
| 致谢 | 第102-104页 |
| 在读期间发表论文及参与课题 | 第104-106页 |
| 发表论文 | 第104页 |
| 参与其他课题 | 第104-106页 |
