论文目录 | |
| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略符号说明 | 第13-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-25页 |
| 1.1 喹诺酮类抗生素的产生及应用 | 第16-17页 |
| 1.2 喹诺酮类耐药机制 | 第17-19页 |
| 1.2.1 拓扑异构酶突变导致的耐药性 | 第17页 |
| 1.2.2 膜蛋白及外排泵改变引起的耐药性 | 第17页 |
| 1.2.3 质粒介导的耐药性 | 第17-19页 |
| 1.2.3.1 qnr基因 | 第18页 |
| 1.2.3.2 氨基糖苷乙酰基转移酶突变体基因aac(6')-Ib-cr | 第18页 |
| 1.2.3.3 质粒介导的外排泵基因qepA | 第18-19页 |
| 1.3 整合子-基因盒系统 | 第19-20页 |
| 1.3.1 整合子的定义 | 第19页 |
| 1.3.2 整合子的分类 | 第19-20页 |
| 1.3.3 基因盒 | 第20页 |
| 1.4 ISCR元件 | 第20-24页 |
| 1.4.1 ISCR元件的发现及分类 | 第20-21页 |
| 1.4.2 ISCR元件的特征 | 第21页 |
| 1.4.3 ISCR1元件的移动与复杂I型整合子的形成 | 第21-23页 |
| 1.4.4 甲氧苄啶耐药基因dfr | 第23-24页 |
| 1.5 立题依据与意义 | 第24-25页 |
| 第二章 水环境中含qnr基因及ISCR1元件耐药细菌的筛选及药敏试验 | 第25-40页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第25-35页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第25-29页 |
| 2.2.1.1 实验菌株 | 第25-26页 |
| 2.2.1.2 培养基及其配制 | 第26页 |
| 2.2.1.3 耐药菌株活化时所用抗生索及其配制 | 第26-27页 |
| 2.2.1.4 主要实验溶液及其配制 | 第27-28页 |
| 2.2.1.5 主要实验试剂及仪器 | 第28-29页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第29-35页 |
| 2.2.2.1 CTAB法提取细菌基因组总DNA | 第29-30页 |
| 2.2.2.2 PCR法检测含qnr基因及ISCR1元件的耐药菌株 | 第30-31页 |
| 2.2.2.3 琼脂糖凝胶电泳法 | 第31-32页 |
| 2.2.2.4 耐药菌株的菌属分析 | 第32页 |
| 2.2.2.5 药物敏感试验(K-B纸片琼脂扩散法) | 第32-35页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第35-39页 |
| 2.3.1 水环境中含qnr基因及ISCR1元件耐药细菌的筛选 | 第35-36页 |
| 2.3.2 含qnr基因及ISCR1元件耐药细菌的菌属分析 | 第36-37页 |
| 2.3.3 含qnr基因及ISCR1元件耐药细菌的药敏性分析 | 第37-39页 |
| 2.4 本章小结 | 第39-40页 |
| 第三章 qnr基因的分型及与其关联的其他耐药基因的检测 | 第40-55页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第40-47页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第40-42页 |
| 3.2.1.1 实验菌株和载体 | 第40页 |
| 3.2.1.2 主要实验试剂 | 第40-42页 |
| 3.2.1.3 主要实验仪器 | 第42页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第42-47页 |
| 3.2.2.1 qnr基因的分型 | 第42-43页 |
| 3.2.2.2 A-T克隆实验 | 第43-45页 |
| 3.2.2.3 质粒小提(碱变性法) | 第45页 |
| 3.2.2.4 重组质粒的筛选和鉴定 | 第45-46页 |
| 3.2.2.5 与qnr基因相关联的其他基因的检测 | 第46-47页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第47-53页 |
| 3.3.1 qnr基因的分型 | 第47-51页 |
| 3.3.1.1 qnrB基因的酶切分型 | 第47-49页 |
| 3.3.1.2 qnr基因的测序分型 | 第49-51页 |
| 3.3.2 其他两种质粒介导的喹诺酮类耐药基因aac(6')-Ib-cr、qepA的检测 | 第51-53页 |
| 3.3.3 其他耐药基因的检测 | 第53页 |
| 3.4 本章小结 | 第53-55页 |
| 第四章 ISCR1元件介导的下游结构分析 | 第55-63页 |
| 4.1 引言 | 第55页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第55-57页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 4.2.1.1 实验菌株 | 第55页 |
| 4.2.1.2 主要实验试剂 | 第55页 |
| 4.2.1.3 主要实验仪器 | 第55-56页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第56-57页 |
| 4.2.2.1 ISCR1元件下游片段的检测分析 | 第56页 |
| 4.2.2.2 含新型dfr基因菌株的复杂I型整合子结构分析 | 第56-57页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第57-62页 |
| 4.3.1 ISCR1元件下游结构分析 | 第57-60页 |
| 4.3.2 含新型dfr基因菌株的复杂I型整合子结构分析 | 第60-62页 |
| 4.3.2.1 含新型dfr基因菌株的I型整合子分析 | 第60页 |
| 4.3.2.2 含新型dfr基因菌株的复杂I型整合子分析 | 第60-62页 |
| 4.4 本章小结 | 第62-63页 |
| 第五章 新型二氢叶酸还原酶(dfr)基因的克隆表达及药敏性分析 | 第63-76页 |
| 5.1 引言 | 第63页 |
| 5.2 实验材料与方法 | 第63-70页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第63-65页 |
| 5.2.1.1 实验菌株 | 第63页 |
| 5.2.1.2 主要实验试剂 | 第63-65页 |
| 5.2.1.3 主要实验仪器 | 第65页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第65-70页 |
| 5.2.2.1 新型dfr基因和对照基因dfrA1克隆菌株的构建 | 第65-67页 |
| 5.2.2.2 新型dfr基因和对照基因dfrA1表达菌株的构建 | 第67页 |
| 5.2.2.3 新型dfr基因和对照基因dfrA1表达菌株表达条件的优化 | 第67-68页 |
| 5.2.2.4 SDS-PAGE电泳 | 第68-70页 |
| 5.2.2.5 新型dfr基因和对照基因dfrA1克隆菌株和表达菌株的药敏性分析 | 第70页 |
| 5.3 实验结果与讨论 | 第70-75页 |
| 5.3.1 新型dfr基因和对照基因dfrA1克隆菌株的构建 | 第70-71页 |
| 5.3.2 新型dfr基因和对照基因dfrA1表达菌株的构建和表达条件的优化 | 第71-73页 |
| 5.3.3 新型dfr基因和对照基因dfrA1克隆菌株和表达菌株的药敏性分折 | 第73-75页 |
| 5.4 本章小结 | 第75-76页 |
| 第六章 新型dfr基因的蛋白纯化及体外辅助细菌生长活性测定 | 第76-82页 |
| 6.1 引言 | 第76页 |
| 6.2 实验材料与方法 | 第76-78页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第76-77页 |
| 6.2.1.1 实验菌株 | 第76页 |
| 6.2.1.2 主要实验试剂 | 第76-77页 |
| 6.2.1.3 主要实验仪器 | 第77页 |
| 6.2.2 实验方法 | 第77-78页 |
| 6.2.2.1 蛋白纯化 | 第77-78页 |
| 6.2.2.2 蛋白体外辅助细菌生长活性分析 | 第78页 |
| 6.3 实验结果与讨论 | 第78-81页 |
| 6.3.1 蛋白纯化 | 第78-80页 |
| 6.3.2 蛋白体外辅助细菌生长活性分析 | 第80-81页 |
| 6.4 本章小结 | 第81-82页 |
| 第七章 全文总结 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| 致谢 | 第90-92页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第92-93页 |
| 学术论文评阅及答辩情况表 | 第93页 |
