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利用反向遗传操作技术构建IBDV候选疫苗株的研究
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利用反向遗传操作技术构建IBDV候选疫苗株的研究
论文目录
 
摘要第1-8 页
Abstract第8-17 页
第一章 绪论第17-25 页
　　· IBDV 的结构和分子生物学第17-19 页
　　　　· IBDV 的形态和血清型第18 页
　　　　· IBDV 的基因组和编码蛋白第18-19 页
　　· IBD 的流行特点第19 页
　　· IBD 的防制第19-21 页
　　　　· IBD 的防控措施第19-20 页
　　　　· IBD 疫苗研究进展第20-21 页
　　· 反向遗传技术在新型疫苗研究中的应用第21-23 页
　　· 问题与展望第23-24 页
　　· 本研究的目的和意义第24-25 页
第二章 亲本毒株筛选及其全基因组的克隆与序列分析第25-34 页
　　摘要第25 页
　　· 材料与方法第25-29 页
　　　　· 病毒、鸡胚及试验动物第25-26 页
　　　　· 主要试剂第26 页
　　　　· 引物设计与合成第26 页
　　　　· 病料处理第26 页
　　　　· 病毒复状第26-27 页
　　　　· 毒价的测定第27 页
　　　　· SPF 鸡致死率的测定第27 页
　　　　· IBDV VP2 抗原性预测分析第27 页
　　　　· IBDV 全基因组RNA 的提取第27 页
　　　　· IBDV 全基因组 RNA 的反转录第27-28 页
　　　　· IBDV 全基因组克隆第28 页
　　　　· IBDV 全基因组遗传演化分析第28-29 页
　　· 结果第29-32 页
　　　　· ELD_(50)测定及致死率测定结果第29 页
　　　　· VP2 序列及抗原性分析第29 页
　　　　· 全基因组扩增及测序第29-30 页
　　　　· 全基因组遗传演化分析第30-32 页
　　· 讨论第32-34 页
　　　　· 亲本毒株的筛选第32-33 页
　　　　· HLJ0504 毒株是一株有代表性的自然重组病毒第33-34 页
第三章 IBDV 新型疫苗株构建模式的筛选第34-49 页
　　摘要第34 页
　　· 材料和方法第34-39 页
　　　　· 质粒、细胞和单克隆抗体第34-35 页
　　　　· 主要试剂第35-36 页
　　　　· 引物设计与合成第36 页
　　　　· 核酶结构的引入第36 页
　　　　· 双点突变及VP5 缺失突变第36 页
　　　　· 全基因组克隆的构建第36-37 页
　　　　· 病毒拯救第37 页
　　　　· 拯救病毒IFA 检测第37-38 页
　　　　· 拯救病毒电镜观察第38 页
　　　　· 拯救病毒RT-PCR 鉴定第38 页
　　　　· 拯救病毒体外复制动力学研究第38 页
　　　　· 拯救病毒毒力试验第38 页
　　　　· 试验鸡法氏囊RT-PCR 与序列测定第38-39 页
　　　　· 试验鸡血清抗体的检测第39 页
　　· 结果第39-47 页
　　　　· 感染性分子克隆的构建第39-40 页
　　　　· 拯救病毒细胞病变第40 页
　　　　· 拯救病毒IFA 检测第40-41 页
　　　　· 电镜观察第41 页
　　　　· 拯救病毒的 RT-PCR 检测第41 页
　　　　· 拯救病毒体外复制动力学研究第41-42 页
　　　　· 试验鸡症状及剖检变化第42-43 页
　　　　· 试验鸡的囊重比与囊指数第43-44 页
　　　　· 试验鸡法氏囊的组织病理变化第44 页
　　　　· 试验鸡法氏囊的 RT-PCR 与序列测定第44-45 页
　　　　· 试验鸡血清抗体的检测第45-47 页
　　· 讨论第47-49 页
　　　　· HLJ0504 细胞嗜性的改变第47 页
　　　　· VP5 是毒力因子第47-48 页
　　　　· 候选疫苗株应具备的特性第48-49 页
第四章 新型疫苗株的构建及其生物学性状测定第49-62 页
　　摘要第49 页
　　· 材料和方法第49-54 页
　　　　· 病毒第49 页
　　　　· 质粒第49-50 页
　　　　· 细胞和单克隆抗体第50 页
　　　　· 实验动物第50 页
　　　　· 主要试剂第50 页
　　　　· 引物设计与合成第50 页
　　　　· HLJ0504 株 VP2 基因替换 Gt 株基因组 VP2第50-52 页
　　　　· 感染性分子克隆的构建第52 页
　　　　· 病毒拯救第52 页
　　　　· 拯救病毒IFA 检测第52 页
　　　　· 拯救病毒电镜观察第52 页
　　　　· 拯救病毒 RT-PCR 鉴定第52 页
　　　　· 拯救病毒在CEF 细胞上的复制特性第52-53 页
　　　　· 动物实验第53 页
　　　　· 攻毒保护试验第53-54 页
　　　　· 拯救病毒遗传稳定性试验第54 页
　　· 结果第54-60 页
　　　　· VP2 修饰、替换与感染性分子克隆构建第54-55 页
　　　　· 病毒拯救第55 页
　　　　· 拯救病毒IFA 检测第55 页
　　　　· 拯救病毒电镜观察第55-56 页
　　　　· 拯救病毒RT-PCR 鉴定第56 页
　　　　· 拯救病毒复制特性研究第56-57 页
　　　　· 拯救病毒的致病性第57-58 页
　　　　· 拯救病毒的免疫效果评价第58-59 页
　　　　· 拯救病毒的遗传稳定性第59-60 页
　　· 讨论第60-62 页
　　　　· 重组病毒rGtHLJVP2 复制特性良好第60 页
　　　　· 重组病毒rGtHLJVP2 对SPF 鸡无致病性第60 页
　　　　· 重组病毒rGtHLJVP2 遗传稳定性良好第60-61 页
　　　　· 重组病毒rGtHLJVP2 免疫原性良好第61-62 页
第五章 新型疫苗株免疫效果的评价第62-71 页
　　摘要第62 页
　　· 材料和方法第62-64 页
　　　　· 病毒第62 页
　　　　· 主要试剂第62 页
　　　　· 试验分组与免疫第62-63 页
　　　　· 血清抗体检测第63 页
　　　　· CD4+、CD8+淋巴细胞分离及检测第63 页
　　　　· 疫苗株交叉保护性试验第63 页
　　　　· 疫苗株致病力评估第63 页
　　　　· 疫苗株在法氏囊中的载量检测第63-64 页
　　　　· 试验鸡法氏囊RT-PCR与序列测定第64 页
　　· 结果第64-69 页
　　　　· 疫苗株免疫效果评价第64-65 页
　　　　· 疫苗株免疫保护效果第65-66 页
　　　　· 疫苗株的致病力比较第66-68 页
　　　　· 试验鸡法氏囊病毒载量的检测第68-69 页
　　· 讨论第69-71 页
　　　　· 疫苗株体液免疫比较第69 页
　　　　· 疫苗株 CD4+、CD8+T 淋巴细胞检测第69-70 页
　　　　· 疫苗株免疫保护效果第70 页
　　　　· 疫苗株的致病性研究第70-71 页
第六章 结论第71-72 页
参考文献第72-79 页
致谢第79-80 页
作者简历第80页

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