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MEV VP2截短片段可溶性表达及单克隆抗体制备
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MEV VP2截短片段可溶性表达及单克隆抗体制备
论文目录
 
摘要第1-8页
Abstract第8-10页
缩略词表第10-11页
第1章 水貂细小病毒概述第11-22页
　　· 水貂细小病毒病原学特征第11-12页
　　　　· MEV的形态及理化特性第11页
　　　　· MEV的血凝性第11-12页
　　　　· MEV的抗原性第12页
　　　　· MEV的培养特性第12页
　　· 水貂细小病毒的分子生物学特性第12-14页
　　　　· MEV基因组特征第12-13页
　　　　· MEV编码的蛋白质第13-14页
　　· 水貂病毒性肠炎研究进展第14-17页
　　　　· 水貂病毒性肠炎的流行病学第14页
　　　　· 水貂病毒性肠炎的临床症状及病理变化第14-15页
　　　　· 水貂细小病毒的诊断方法第15-17页
　　　　· 水貂细小病毒的防治措施第17页
　　· 单克隆抗体研究进展第17-22页
　　　　· 鼠源单克隆抗体第17-18页
　　　　· 人源单克隆抗体第18-19页
　　　　· 基因工程单克隆抗体第19-22页
第2章 水貂细小病毒VP2基因片段表达第22-40页
　　· 试验材料第22-24页
　　　　· 毒株、载体、菌种第22页
　　　　· 主要试剂和仪器第22-23页
　　　　· 主要溶液的配制第23-24页
　　· 试验方法第24-32页
　　　　· 水貂细小病毒DNA的提取第24-25页
　　　　· 引物设计第25-26页
　　　　· 目的片段的回收第26页
　　　　· VP2目的片段与PMD18-T载体连接第26-27页
　　　　· 连接产物的转化第27页
　　　　· 重组质粒的鉴定第27-28页
　　　　· 质粒双酶切鉴定第28-29页
　　　　· 重组质粒pET32a-Loop1、pET32a-Loop2、pET32a-Loop3的构建第29页
　　　　· 重组蛋白的原核表达第29-30页
　　　　· 重组蛋白的纯化及鉴定第30-31页
　　　　· 间接ELISA检测重组蛋白的抗原性第31-32页
　　· 结果与分析第32-39页
　　　　· PCR扩增第32-33页
　　　　· 重组基因鉴定第33页
　　　　· 重组蛋白表达质粒的构建及鉴定第33-34页
　　　　· 重组质粒的测序结果第34-35页
　　　　· 重组蛋白诱导表达条件的优化第35-38页
　　　　· 重组蛋白过柱纯化第38页
　　　　· 间接ELISA对重组蛋白抗原性的鉴定第38-39页
　　· 讨论第39-40页
第3章 MEV VP2基因特异性单克隆抗体制备第40-54页
　　· 材料和方法第40-45页
　　　　· 细胞系和菌株第40页
　　　　· 主要试剂和材料第40-41页
　　　　· 主要试剂配制第41页
　　　　· 病毒的增殖和浓缩第41页
　　　　· 动物免疫第41-42页
　　　　· 间接ELISA检测方法的优化第42页
　　　　· 细胞融合第42-43页
　　　　　　· 制备饲养细胞第42-43页
　　　　　　· 制备脾细胞第43页
　　　　· 骨髓瘤细胞SP2/0处理第43-44页
　　　　· 脾细胞与骨髓瘤细胞融合第44-45页
　　　　· 融合细胞培养第45页
　　· 阳性孔杂交瘤细胞筛选第45-46页
　　　　· 杂交瘤细胞亚克隆化第45-46页
　　　　· 杂交瘤细胞的扩大培养第46页
　　　　· 杂交瘤细胞的冻存第46页
　　　　· 杂交瘤细胞的复苏第46页
　　· 单克隆抗体腹水的制备第46-47页
　　　　· 腹水单克隆抗体的纯化浓缩第47页
　　· 单克隆抗体鉴定第47-48页
　　　　· 特异性试验鉴定第47页
　　　　· 单克隆抗体效价及浓度测定第47页
　　　　· 抗体浓度的测定第47-48页
　　· 结果与分析第48-53页
　　　　· ELISA反应体系优化第48-50页
　　　　　　· 包被原浓度的确定第48页
　　　　　　· 封闭液浓度的确定第48-49页
　　　　　　· 酶标二抗稀释浓度的确定第49-50页
　　　　· 融合细胞小鼠选取第50页
　　　　· 阳性细胞筛选第50-51页
　　　　· 腹水抗体效价测定第51页
　　　　· 腹水单克隆抗体特异性检测第51-53页
　　· 讨论第53-54页
参考文献第54-59页
致谢第59 页

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