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结核分枝杆菌Pup-蛋白酶体系统蛋白的表达纯化研究

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结核分枝杆菌Pup-蛋白酶体系统蛋白的表达纯化研究
论文目录
 
摘要第1-4页
ABSTRACT第4-8页
第一部分 前言第8-24页
  1 真核细胞泛素介导的蛋白降解途径概述第8-9页
    · 真核细胞蛋白降解过程第8-9页
    · 真核细胞蛋白酶体第9页
  2 原核细胞蛋白类泛素降解途径概述第9-17页
    · 原核蛋白酶体的研究第9-11页
    · 类泛素蛋白Pup序列及结构特征第11-13页
    · 蛋白酶体辅助因子第13-14页
      · 去酰胺酶Dop第13页
      · 连接酶PafA第13-14页
    · Pup介导的蛋白质降解过程第14-15页
    · Pup-蛋白酶系统的靶蛋白及其功能第15-16页
    · 真核生物和原核生物蛋白酶体系统的比较第16-17页
  3 重组蛋白技术概述第17-21页
    · 重组质粒的构建第18-19页
      · 目的基因的获得第18页
      · 重组质粒构建第18-19页
      · 纯化及检测标签的选择第19页
    · 重组蛋白的诱导表达第19页
    · 重组蛋白质折叠概述第19-20页
    · 蛋白质结构概述第20-21页
    · 重组蛋白的纯化第21页
    · 重组蛋白的检测第21页
  4 多克隆抗体技术概述第21-22页
  5 基因敲除技术概述第22-23页
  6 研究的目的和意义第23-24页
第二部分 实验材料和方法第24-43页
  1 实验材料第24-27页
    · 生物材料第24页
    · 实验仪器第24页
    · 试剂、技术支持第24-25页
    · 相关溶液配制第25-27页
  2 实验方法第27-43页
    · 目的基因的获得第27-29页
      · 引物设计第27-28页
      · 基因克隆第28-29页
    · 重组质粒的构建第29-33页
    · 重组质粒的转化第33页
    · Pup蛋白的诱导表达与纯化第33-36页
      · Pup蛋白的诱导表达第33-34页
      · Pup蛋白的纯化第34页
      · Pup多克隆抗体的制备第34-35页
      · Pup蛋白的酶切与检测第35-36页
    · Dop、FabD和PafA蛋白的诱导表达和纯化第36-38页
      · Dop蛋白的表达和纯化第36-37页
      · FabD蛋白的表达和纯化第37-38页
      · PafA蛋白的表达和纯化第38页
    · 耻垢分枝杆菌dop基因敲除的初步试验第38-43页
      · 耻垢分枝杆菌基因组的提取第38-39页
      · 目的基因克隆第39-41页
      · pKO穿梭敲除质粒的构建第41-42页
      · 耻垢分枝杆菌感受态细胞的制备第42页
      · 穿梭质粒的电转化第42页
      · 敲除菌株的筛选第42-43页
第三部分 实验结果第43-65页
  1 基因分析和蛋白序列分析第43-52页
    · pup基因的优化分析第43-44页
    · Pup蛋白的序列分析第44-45页
    · Dop蛋白的序列分析第45-48页
    · FabD蛋白的序列分析第48-50页
    · PafA蛋白的序列分析第50-52页
  2 重组质粒构建结果第52-54页
    · pGEX-2T-his_6-pup重组质粒构建结果第52-53页
    · pET21cc-dop重组质粒构建结果第53页
    · pET21cc-fabD重组质粒构建结果第53-54页
    · pET21cc-pafA和pBAD-pafA重组质粒构建结果第54页
  3 蛋白诱导表达纯化结果第54-63页
    · Pup蛋白表达、纯化和酶切第54-57页
      · Pup蛋白表达结果第54-55页
      · Pup蛋白纯化结果第55-56页
      · GST-His_6-Pup蛋白酶切结果第56页
      · GST-His_6-Pup蛋白免疫印迹结果第56-57页
    · Dop蛋白表达与纯化第57-59页
      · Dop蛋白表达结果第57-58页
      · Dop蛋白纯化结果第58-59页
      · Dop蛋白免疫印迹结果第59页
    · FabD蛋白的表达和纯化第59-61页
      · FabD蛋白的表达结果第59-60页
      · FabD蛋白的纯化结果第60页
      · FabD蛋白的免疫印迹结果第60-61页
    · PafA蛋白的表达与纯化第61-63页
      · PafA蛋白表达结果第61-63页
      · PafA蛋白纯化结果第63页
  4 dop基因敲除的初步结果第63-65页
    · pKO穿梭质粒的构建结果第63-64页
    · 敲除菌株的筛选结果第64-65页
第四部分 结论与展望第65-67页
参考文献第67-71页
个人简介第71-72页
导师简介第72-73页
致谢第73页

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