结核分枝杆菌Pup-蛋白酶体系统蛋白的表达纯化研究
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结核分枝杆菌Pup-蛋白酶体系统蛋白的表达纯化研究
论文目录
摘要
第1-4页
ABSTRACT
第4-8页
第一部分 前言
第8-24页
1 真核细胞泛素介导的蛋白降解途径概述
第8-9页
· 真核细胞蛋白降解过程
第8-9页
· 真核细胞蛋白酶体
第9页
2 原核细胞蛋白类泛素降解途径概述
第9-17页
· 原核蛋白酶体的研究
第9-11页
· 类泛素蛋白Pup序列及结构特征
第11-13页
· 蛋白酶体辅助因子
第13-14页
· 去酰胺酶Dop
第13页
· 连接酶PafA
第13-14页
· Pup介导的蛋白质降解过程
第14-15页
· Pup-蛋白酶系统的靶蛋白及其功能
第15-16页
· 真核生物和原核生物蛋白酶体系统的比较
第16-17页
3 重组蛋白技术概述
第17-21页
· 重组质粒的构建
第18-19页
· 目的基因的获得
第18页
· 重组质粒构建
第18-19页
· 纯化及检测标签的选择
第19页
· 重组蛋白的诱导表达
第19页
· 重组蛋白质折叠概述
第19-20页
· 蛋白质结构概述
第20-21页
· 重组蛋白的纯化
第21页
· 重组蛋白的检测
第21页
4 多克隆抗体技术概述
第21-22页
5 基因敲除技术概述
第22-23页
6 研究的目的和意义
第23-24页
第二部分 实验材料和方法
第24-43页
1 实验材料
第24-27页
· 生物材料
第24页
· 实验仪器
第24页
· 试剂、技术支持
第24-25页
· 相关溶液配制
第25-27页
2 实验方法
第27-43页
· 目的基因的获得
第27-29页
· 引物设计
第27-28页
· 基因克隆
第28-29页
· 重组质粒的构建
第29-33页
· 重组质粒的转化
第33页
· Pup蛋白的诱导表达与纯化
第33-36页
· Pup蛋白的诱导表达
第33-34页
· Pup蛋白的纯化
第34页
· Pup多克隆抗体的制备
第34-35页
· Pup蛋白的酶切与检测
第35-36页
· Dop、FabD和PafA蛋白的诱导表达和纯化
第36-38页
· Dop蛋白的表达和纯化
第36-37页
· FabD蛋白的表达和纯化
第37-38页
· PafA蛋白的表达和纯化
第38页
· 耻垢分枝杆菌dop基因敲除的初步试验
第38-43页
· 耻垢分枝杆菌基因组的提取
第38-39页
· 目的基因克隆
第39-41页
· pKO穿梭敲除质粒的构建
第41-42页
· 耻垢分枝杆菌感受态细胞的制备
第42页
· 穿梭质粒的电转化
第42页
· 敲除菌株的筛选
第42-43页
第三部分 实验结果
第43-65页
1 基因分析和蛋白序列分析
第43-52页
· pup基因的优化分析
第43-44页
· Pup蛋白的序列分析
第44-45页
· Dop蛋白的序列分析
第45-48页
· FabD蛋白的序列分析
第48-50页
· PafA蛋白的序列分析
第50-52页
2 重组质粒构建结果
第52-54页
· pGEX-2T-his_6-pup重组质粒构建结果
第52-53页
· pET21cc-dop重组质粒构建结果
第53页
· pET21cc-fabD重组质粒构建结果
第53-54页
· pET21cc-pafA和pBAD-pafA重组质粒构建结果
第54页
3 蛋白诱导表达纯化结果
第54-63页
· Pup蛋白表达、纯化和酶切
第54-57页
· Pup蛋白表达结果
第54-55页
· Pup蛋白纯化结果
第55-56页
· GST-His_6-Pup蛋白酶切结果
第56页
· GST-His_6-Pup蛋白免疫印迹结果
第56-57页
· Dop蛋白表达与纯化
第57-59页
· Dop蛋白表达结果
第57-58页
· Dop蛋白纯化结果
第58-59页
· Dop蛋白免疫印迹结果
第59页
· FabD蛋白的表达和纯化
第59-61页
· FabD蛋白的表达结果
第59-60页
· FabD蛋白的纯化结果
第60页
· FabD蛋白的免疫印迹结果
第60-61页
· PafA蛋白的表达与纯化
第61-63页
· PafA蛋白表达结果
第61-63页
· PafA蛋白纯化结果
第63页
4 dop基因敲除的初步结果
第63-65页
· pKO穿梭质粒的构建结果
第63-64页
· 敲除菌株的筛选结果
第64-65页
第四部分 结论与展望
第65-67页
参考文献
第67-71页
个人简介
第71-72页
导师简介
第72-73页
致谢
第73页
本篇论文共
73
页,
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