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鸡传染性支气管炎病毒RT-PCR和RT-LAMP检测方法的建立
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鸡传染性支气管炎病毒RT-PCR和RT-LAMP检测方法的建立
论文目录
 
摘要第1-5页
Abstract第5-6页
目录第6-9页
第一部分 前言第9-24页
　　1 鸡传染性支气管炎病毒分子生物学研究进展第9-15页
　　　　· 病毒形态结构第9-10页
　　　　· 病毒粒子结构第10-11页
　　　　· 基因组结构第11-12页
　　　　· 结构蛋白及其生物学功能第12-15页
　　　　　　· 纤突蛋白(S)第13页
　　　　　　· 囊膜蛋白(M)第13-14页
　　　　　　· 核衣壳蛋白(N)第14页
　　　　　　· 小囊膜蛋白(E)第14-15页
　　2 IB检测方法的研究进展第15-17页
　　　　· 血清学诊断方法第15-16页
　　　　　　· 琼扩试验(AGP)第15页
　　　　　　· 酶联免疫吸附实验(ELISA)第15-16页
　　　　　　· 中和试验(VN)第16页
　　　　　　· 微量中和试验(MVN)第16页
　　　　　　· 斑点免疫金测定法(DIGFA)第16页
　　　　· 分子生物学检测技术第16-17页
　　　　　　· RT-PCR第16-17页
　　　　　　· RT-PCR结合探针第17页
　　　　　　· 限制性酶切片段多态性分析(RFLP)分型第17页
　　3 环介导等温扩增(LAMP)技术第17-23页
　　　　· LAMP法的引物设计第18页
　　　　· LAMP法的基本原理第18-21页
　　　　· LAMP法的特点第21-22页
　　　　· LAMP法的反应体系第22页
　　　　· LAMP法在动物病毒病检测中的应用第22-23页
　　　　　　· 禽流感病毒(AIV)的检测第22页
　　　　　　· 口蹄疫病毒(FMDV)的检测第22-23页
　　　　　　· 猪水疱病病毒(SVDV)的检测第23页
　　4 研究的目的和意义第23-24页
第二部分 试验研究第24-50页
　　第一章 鸡传染性支气管炎病毒RT-PCR检测方法的建立第24-38页
　　　　1 材料第24-25页
　　　　　　· 仪器与设备第24页
　　　　　　· 试剂第24-25页
　　　　　　· 菌种、毒株第25页
　　　　　　· 检测样品第25页
　　　　2 方法第25-32页
　　　　　　· 引物的设计第25页
　　　　　　· IBV总RNA的提取第25-26页
　　　　　　· IBV目的M基因片段的克隆第26-29页
　　　　　　　　· cDNA的合成(RT)第26页
　　　　　　　　· 目的M基因片段PCR扩增第26-27页
　　　　　　　　· 纯化回收第27-28页
　　　　　　　　· DH5α感受态的制备第28-29页
　　　　　　· IBV目的M基因片段的鉴定第29-30页
　　　　　　　　· 质粒的提取第29-30页
　　　　　　　　· 重组质粒的鉴定第30页
　　　　　　· RT-PCR反应条件的确定第30页
　　　　　　· 敏感性试验第30-31页
　　　　　　· 特异性试验第31页
　　　　　　　　· DNA的提取第31页
　　　　　　　　· RNA的提取与反转录第31页
　　　　　　　　· PCR扩增第31页
　　　　　　· 检测应用第31-32页
　　　　3 结果与分析第32-36页
　　　　　　· IBV目的M基因片段扩增结果第32页
　　　　　　· IBV目的M基因片段的鉴定第32-34页
　　　　　　· 反应条件的优化第34-35页
　　　　　　3.4 IBV RT-PCR敏感性试验结果第35页
　　　　　　3.5 IBV RT-PCR特异性试验结果第35-36页
　　　　　　3.6 IBV RT-PCR应用检测结果第36页
　　　　4 讨论第36-38页
　　第二章 IBV RT-LAMP检测方法的初步研究第38-50页
　　　　1 材料第38-40页
　　　　　　· 仪器与设备第38-39页
　　　　　　· 试剂第39页
　　　　　　· 菌种、毒株第39-40页
　　　　2 方法第40-43页
　　　　　　· 引物设计第40页
　　　　　　· 模板的制备第40-41页
　　　　　　　　· IBV总RNA的提取第40页
　　　　　　　　· cDNA制备(RT)第40页
　　　　　　　　· 重组质粒IBV-pMD19-T的提取第40-41页
　　　　　　· 基础RT-LAMP反应第41-42页
　　　　　　　　· 反应体系(25μL)第41-42页
　　　　　　　　· 结果读判第42页
　　　　　　2.4 IBV RT-LAMP扩增产物鉴定第42页
　　　　　　· RT-LAMP反应条件的确定第42页
　　　　　　· RT-LAMP敏感性试验第42-43页
　　　　　　· RT-LAMP特异性试验第43页
　　　　　　　　· 基因模板的制备第43页
　　　　　　　　· LAMP扩增第43页
　　　　3 结果与分析第43-49页
　　　　　　· 引物设计第43-44页
　　　　　　· IBV基础RT-LAMP扩增结果第44-45页
　　　　　　3.3 IBV RT-LAMP扩增产物的酶切鉴定第45页
　　　　　　3.4 IBV RT-LAMP反应条件的优化第45-47页
　　　　　　3.5 IBV RT-LAMP敏感性试验结果第47页
　　　　　　3.6 IBV RT-LAMP特异性试验结果第47-49页
　　　　4 讨论第49-50页
第三部分 结论第50-51页
参考文献第51-56页
致谢第56 页

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