论文目录 | |
| 中文摘要 | 第11-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-20页 |
| 1.1 烟草概况 | 第14页 |
| 1.2 烟草野火病及角斑病的研究现状 | 第14-16页 |
| 1.2.1 烟草野火病的发生状况 | 第14页 |
| 1.2.2 烟草野火病病原及发病特征 | 第14-15页 |
| 1.2.3 烟草角斑病的发生状况 | 第15页 |
| 1.2.4 烟草角斑病病原及发病特征 | 第15页 |
| 1.2.5 烟草野火病与角斑病侵染循环 | 第15-16页 |
| 1.2.6 烟草野火病与角斑病的防治 | 第16页 |
| 1.3 烟草野火病与角斑病的检测鉴定方法 | 第16-17页 |
| 1.3.1 发病症状观察法 | 第16页 |
| 1.3.2 组织分离法 | 第16-17页 |
| 1.3.3 PCR扩增技术 | 第17页 |
| 1.4 环介导等温扩增技术 | 第17-19页 |
| 1.4.1 LAMP技术原理 | 第17-18页 |
| 1.4.2 环介导等温扩增(LAMP)技术的优点 | 第18页 |
| 1.4.3 环介导等温扩增技术(LAMP)的应用 | 第18-19页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-28页 |
| 2.1 试验菌株 | 第20页 |
| 2.2 试验叶片 | 第20页 |
| 2.3 试验试剂 | 第20-21页 |
| 2.4 试验仪器 | 第21页 |
| 2.5 试验方法 | 第21-28页 |
| 2.5.1 试验培养基及试剂的配制 | 第21-22页 |
| 2.5.2 细菌基因组DNA的提取 | 第22页 |
| 2.5.2.1 细菌基因组DNA(gDNA)提取 | 第22页 |
| 2.5.2.2 病菌DNA基因组的粗提取 | 第22页 |
| 2.5.2.3 感病叶片病菌DNA模板的粗制备 | 第22页 |
| 2.5.3 烟草野火病菌和烟草角斑病菌分离与鉴定 | 第22-25页 |
| 2.5.3.1 烟草野火病菌和烟草角斑病菌的分离 | 第22-23页 |
| 2.5.3.2 烟草野火病菌与烟草角斑病菌的鉴定 | 第23-24页 |
| 2.5.3.3 烟草野火病菌与烟草角斑病菌的纯化 | 第24页 |
| 2.5.3.4 烟草角斑病菌的接种验证 | 第24-25页 |
| 2.5.3.5 烟草野火病菌与烟草角斑病菌的保存 | 第25页 |
| 2.5.4 烟草野火病菌与烟草角斑病菌特异性区段的获取 | 第25-26页 |
| 2.5.4.1 烟草野火病菌特异性区段的获取及普通PCR引物设计 | 第25页 |
| 2.5.4.2 烟草野火病普通PCR引物特异性验证 | 第25页 |
| 2.5.4.3 利用特异性引物反向寻找烟草野火病菌的特异性区段 | 第25-26页 |
| 2.5.4.4 烟草角斑病菌特异性区段的获取 | 第26页 |
| 2.5.5 LAMP引物设计 | 第26页 |
| 2.5.6 LAMP初始反应体系的建立 | 第26-27页 |
| 2.5.7 LAMP引物适用性验证 | 第27页 |
| 2.5.8 LAMP反应体系反应物使用浓度及反应条件的优化 | 第27页 |
| 2.5.9 LAMP反应体系染色染料的选择 | 第27页 |
| 2.5.10 LAMP反应体系灵敏性检测 | 第27页 |
| 2.5.11 LAMP反应体系可靠性的验证 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-61页 |
| 3.1 烟草角斑病菌的分离与鉴定 | 第28页 |
| 3.2 烟草角斑病菌的纯化 | 第28-29页 |
| 3.3 烟草角斑病菌的接种验证 | 第29页 |
| 3.4 烟草野火病菌特异性区段的获取 | 第29-36页 |
| 3.5 烟草野火病菌普通PCR引物的设计 | 第36-38页 |
| 3.6 烟草野火病普通PCR引物的特异性验证 | 第38-40页 |
| 3.7 烟草野火病菌反向寻找特异性区段 | 第40-41页 |
| 3.8 烟草角斑病菌特异性区段的获取 | 第41-43页 |
| 3.9 烟草野火病菌和烟草角斑病菌LAMP引物设计 | 第43-44页 |
| 3.10 LAMP反应体系的建立及LAMP引物适用性试验 | 第44-45页 |
| 3.11 LAMP反应体系反应物使用浓度及反应条件的优化 | 第45-54页 |
| 3.11.1 烟草野火病LAMP检测体系反应物使用浓度及反应条件的优化 | 第45-50页 |
| 3.11.1.1 BstDNAPolymerase使用量的优化 | 第45-46页 |
| 3.11.1.2 dNTP使用浓度的优化 | 第46页 |
| 3.11.1.3 Mg2+使用浓度的优化 | 第46-47页 |
| 3.11.1.4 甜菜碱使用浓度的优化 | 第47-48页 |
| 3.11.1.5 反应温度的优化 | 第48页 |
| 3.11.1.6 内外引物浓度配比优化 | 第48-49页 |
| 3.11.1.7 反应时间的优化 | 第49-50页 |
| 3.11.2 烟草角斑病LAMP检测体系反应物使用浓度及反应条件的优化 | 第50-54页 |
| 3.11.2.1 BstDNAPolymerase使用量的优化 | 第50页 |
| 3.11.2.2 dNTP使用浓度的优化 | 第50-51页 |
| 3.11.2.3 Mg2+使用浓度的优化 | 第51-52页 |
| 3.11.2.4 甜菜碱使用浓度的优化 | 第52页 |
| 3.11.2.5 反应温度的优化 | 第52-53页 |
| 3.11.2.6 内外引物浓度配比优化 | 第53-54页 |
| 3.11.2.7 反应时间的优化 | 第54页 |
| 3.12 LAMP反应体系染色染料的选择 | 第54-55页 |
| 3.13 LAMP反应灵敏性检测 | 第55-56页 |
| 3.14 LAMP反应所需的病株材料使用方法的优化 | 第56-57页 |
| 3.15 LAMP检测体系可靠性检测 | 第57-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 4.1 LAMP检测体系染料选择 | 第61页 |
| 4.2 反应加样时避免污染 | 第61-62页 |
| 4.3 加样环境的选择 | 第62页 |
| 4.4 大田检测时加样 | 第62-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 6 参考文献 | 第64-70页 |
| 7 附录 | 第70-75页 |
| 8 致谢 | 第75-76页 |
| 9 攻读学位期间发表论文情况 | 第76页 |
