论文目录 | |
| 摘要 | 第1-9
页 |
| Abstract | 第9-14
页 |
| 缩略语(按照英文首字母顺序排序) | 第14-15
页 |
| 第一章 MicroRNA 及基因芯片相关研究进展 | 第15-27
页 |
| 1 miRNA 的相关研究 | 第16-21
页 |
| · miRNA 的发现及其自身特点 | 第16
页 |
| · miRNA 的生源论及基因表达调控的机制 | 第16-17
页 |
| · miRNAs 与疾病之间的关系 | 第17-18
页 |
| · 组织特异性表达miRNA | 第18-19
页 |
| · 与miRNA 生物信息学研究相关的数据库 | 第19-21
页 |
| 2 微流体芯片（μParaflo? Microfluidic PicoArray Reactor） | 第21-25
页 |
| · 基因芯片的历史沿革及相关研究 | 第21-22
页 |
| · 微流体芯片 | 第22
页 |
| · 微流体芯片与点样芯片（Spotted Oligonucleotide Microarrays）之间的比较 | 第22-25
页 |
| · 点样芯片 | 第22
页 |
| · 原位合成（In situ synthesis）微流体芯片 | 第22-24
页 |
| · 点样芯片与微流体芯片杂交信号 | 第24-25
页 |
| · 微流体芯片的应用 | 第25
页 |
| 3 展望 | 第25-27
页 |
| 第二章 研究目的和实验方案 | 第27-29
页 |
| 1 研究目的和意义 | 第27
页 |
| 2 研究的主要内容 | 第27-28
页 |
| 3 实验的技术路线 | 第28-29
页 |
| 第三章 基于文献搜索小鼠不同组织表达miRNAs 库的构建 | 第29-37
页 |
| 1 材料 | 第29
页 |
| 2 方法 | 第29
页 |
| 3 结果 | 第29-36
页 |
| · 小鼠各个组织miRNA 表达信息 | 第29-33
页 |
| · 不同组织表达的miRNAs 及组织特异性表达的miRNAs 统计分析 | 第33-36
页 |
| 4 讨论 | 第36-37
页 |
| 第四章 小鼠不同组织small RNA 库构建 | 第37-53
页 |
| 1 材料与设备及试剂 | 第37-40
页 |
| · 材料 | 第37
页 |
| · 设备与试剂 | 第37
页 |
| · 设备 | 第37
页 |
| · 试剂 | 第37
页 |
| · 试剂配制 | 第37-40
页 |
| · 40 %（w/v, 100 ml）丙烯酰胺（Acrylamide） | 第37-38
页 |
| · 10 %（w/v，1 ml）过硫酸铵（APS） | 第38
页 |
| · 1mm 玻璃板15 % urea-PAGE 凝胶配置（RNA 电泳用，7.5 ml） | 第38
页 |
| · 0.75 mm 玻璃板696非变性PAGE 凝胶配置（DNA 电泳用，5 ml） | 第38
页 |
| · 5×TBE buffer (pH 8.3) (500 ml) | 第38
页 |
| · 3 M 醋酸钠（pH 5.2）（100 ml） | 第38-39
页 |
| · 10×MOPS buffer (pH 7.0) (200 ml) | 第39
页 |
| · MOPS 胶配置方法 | 第39
页 |
| · 10×RNA Loading buffer（Agarose 凝胶电泳用，1 ml） | 第39
页 |
| · 2×RNA Loading buffer（PAGE 凝胶电泳用，1 ml） | 第39-40
页 |
| 2 方法 | 第40-45
页 |
| · 小鼠组织总RNA 分离及浓缩 | 第40
页 |
| · 总RNA 分离 | 第40
页 |
| · 总RNA 浓缩 | 第40
页 |
| · 15 %尿素变性PAGE 凝胶分离small RNA | 第40-45
页 |
| · 15 %尿素变性PAGE 凝胶预电泳 | 第40
页 |
| · 样品电泳 | 第40-41
页 |
| · 割胶回收分离small RNA | 第41
页 |
| · 连接5’RNA ADT | 第41-42
页 |
| · 15 %尿素变性PAGE 胶回收5’RNA ADT 与small RNA 连接后的产物 | 第42
页 |
| · 连接3’RNA ADT | 第42-43
页 |
| · 15%尿素变性PAGE 胶回收3’RNA ADT 与small RNA 连接后的产物 | 第43
页 |
| · 连接5’RNA ADT 和3’RNA ADT 的small RNA 的逆转录（RT）和PCR 扩增 | 第43-44
页 |
| · 连接产物RT 生成cDNA | 第43
页 |
| · PCR 扩增small RNA | 第43-44
页 |
| · PCR 产物纯化 | 第44
页 |
| · 6 %非变性PAGE 凝胶回收构建的miRNA 的DNA 库 | 第44-45
页 |
| · 准备凝胶电泳 | 第44
页 |
| · 割胶回收miRNA 对应的DNA 片段 | 第44-45
页 |
| · miRNA 文库验证 | 第45
页 |
| 3 结果 | 第45-52
页 |
| · 8 周龄雄性小鼠六种组织总RNA 提取及检测 | 第45-46
页 |
| · small RNA PAGE 回收 | 第46-47
页 |
| · 5’RNA ADT 连接结果 | 第47-48
页 |
| · 3’RNA ADT 连接结果 | 第48
页 |
| · RT-PCR 结果 | 第48-49
页 |
| · 割胶回收miRNA DNA 库 | 第49-50
页 |
| · Second PCR | 第50-52
页 |
| 4 讨论 | 第52-53
页 |
| 第五章 微流体PicoArray 芯片筛选组织特异性表达miRNA | 第53-66
页 |
| 1 材料 | 第53
页 |
| 2 设备与试剂 | 第53
页 |
| · 主要设备及软件 | 第53
页 |
| · 试剂 | 第53
页 |
| · 6×SSPE 缓冲液配置 | 第53
页 |
| · 其他试剂 | 第53
页 |
| 3 方法 | 第53-56
页 |
| · 寡核苷酸微流体PicoArray 芯片合成 | 第53
页 |
| · miRNA 库标记及杂交 | 第53-55
页 |
| · miRNA 库PCR 荧光标记 | 第54-55
页 |
| · 寡核苷酸探针与荧光标记产物杂交 | 第55
页 |
| · 杂交图像采集及数据分析 | 第55-56
页 |
| 4 结果 | 第56-65
页 |
| · 芯片杂交结果图像 | 第56
页 |
| · 芯片数据分析 | 第56-65
页 |
| · 芯片检测到的小鼠六种组织中表达的miRNAs | 第56-61
页 |
| · 芯片实验结果与精读文献收集的miRNAs 比较 | 第61
页 |
| · 六种组织中高丰度表达的miRNAs | 第61-62
页 |
| · 组织特异性表达的miRNAs | 第62-65
页 |
| 5 讨论 | 第65-66
页 |
| 结论 | 第66-67
页 |
| 参考文献 | 第67-72
页 |
| 致谢 | 第72
页 |
