| [生化制药论文]
作者：娄婷 杨静 徐龙 余保
【摘要】 目的： 研究 大黄素对结肠近端平滑肌细胞钙离子依赖氯离子通道（ClCa channel）的作用。 方法 ： 采用RM6200四道仪记录黄体酮对平滑肌的等长收缩活动作用，相对定量的单细胞RTPCR法检测平滑肌细胞ClCa通道mRNA的表达。 结果： 大黄素显著增强离体结肠平滑肌肌条和单个平滑肌细胞的收缩，并可使ClCa电流显著增强，作用与剂量呈正相关。DIDS和NFA可阻滞大黄素的作用。豚鼠近端结肠平滑肌细胞有ClCa1和ClCa2基因的mRNA表达， ClCa1基因的mRNA表达强度是ClCa2基因的mRNA的5.3±0.71（n=5, P<0.01）倍。50μM大黄素孵育可以使ClCa1基因的mRNA表达增强（n=5, P<0.01）。结论： 大黄素可通过兴奋氯离子通道电流引起结肠平滑肌收缩，大黄素对氯离子通道兴奋作用可能与增强结肠平滑肌细胞ClCa1基因表达有关。
【关键词】 结肠； 平滑肌细胞； ClCa通道； 膜片钳； 豚鼠
大黄素(emodin) 是大黄(Rhubarb)有效成分蒽醌类衍生物之一，已被证实可增强肠道蠕动，促进平滑肌细胞的收缩活动［1,2］。钙离子依赖氯离子通道(Ca2+activated Cl- channels, ClCa Channel)是平滑肌组织中非常重要的，与收缩密切相关的离子通道。而大黄素对ClCa通道的作用，国内外未见相关报道。本研究利用全细胞膜片钳和相对定量的单细胞RTPCR等技术研究大黄素对大鼠近端结肠ClCa通道以及基因表达的 影响 ，进一步探讨大黄素促结肠动力作用机制。
1 材料与方法
11 标本制备健康成年清洁级豚鼠，250～300g，雌雄不拘，卒击枕部至昏，断颈放干血液，剖腹取6cm 左右长的近端结肠，迅速放入充以95 % O2 和5 % CO2的混合气的Tyrode 液中，沿肠系膜纵行剪开，将去黏膜的组织剪成宽3 mm、长15 mm 的结肠带肌条和环行平滑肌肌条。制备单个平滑肌细胞［2］……
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