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耐亚胺培南铜绿假单胞菌CARB-3基因的发现 |
| [高血压医学论文] 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，Pa）是临床常见的条件致病菌，由于其固有和获得性耐药，使临床治疗成为一大难题。CARB基因编码产生羧苄西林酶，为β-内酰胺酶Bush分类中的2c，在我国CARB基因、流行基因亚型的研究未见报道。我们研究分析了2005年1～12月临床分离的34株耐亚胺培南铜绿假单胞菌（IMPRPa），发现了我院IMPRPa携带CARB-3基因，现总结报告如下。
1 材料与方法
1.1 菌株来源与质控菌株 34株耐亚胺培南铜绿假单胞菌来自于2005年1～12月我院住院病人的临床分离标本（包括：痰液、尿液、伤口分泌物、脓液、血液等），质控菌株包括：铜绿假单胞菌ATCC27853，大肠埃希菌ATCC25922。
1.2 菌株鉴定及亚胺培南耐药菌株筛选 试验菌株经BD Phoenix100全自动微生物分析仪鉴定到种，采用该仪器配套药敏试验复合板筛选亚胺培南耐药的Pa。
1.3 主要仪器设备与试剂 Eppendorf centrifuge 5417R 低温离心机，恒温金属浴（杭州大和），MJ Peltier Thermal Cycler（MJ Research），Bio-RAD电泳仪，Bio-RAD 凝胶成像系统， 琼脂糖（OXOID），100bp DNA Ladder Marker（大连宝森），6×Loading buffer（北京天为时代）。
1.4 模板DNA提取 采用蛋白酶K消化法。
1.5 基因扩增 引物序列为：P1：5′-AAA GCA GAT CTT GTG ACC TATTC -3′，P2： 5′-TCA GCG CGA CTG TGA TGT ATA AAC -3′，扩增产物为588bp。热循环参数为：93℃预变性3min，93℃ 60s，55℃ 60s，72℃ 60s，最后一个72℃ 延伸5min，共循环35周期。纯水为阴性对照。耐药基因检测试剂盒由无锡市克隆遗传技术研究所提供。
1.6 结果判断 取10μl扩增产物与2μl 6×上样缓冲液混匀，点样于1.5%琼脂糖凝胶，在100V电压电泳30min，出现588bp的条带即为CARB基因阳性。用凝胶成像系统观察并照相。
1.7&n……
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| 投稿人：gf6h6 |
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最后编辑：647754 |
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