[高血压医学论文]
【摘要】 目的: 构建人源肝癌单链抗体（scFv）基因真核表达载体pSectag2/scFv并在中国仓鼠卵巢（CHO)细胞中获得表达。方法: 利用噬菌体细胞内重组技术筛选得到了肝癌特异性scFv, 用PCR技术及核酸内切酶技术将其克隆入真核表达载体pSectag2, 构建重组载体pSectag2/scFv, 测序鉴定后, 电转染CHO细胞, 利用SDSPAGE和Western blot检测目的蛋白的表达情况。结果: 将750 bp人源肝癌scFv插入真核表达载体pSectag2, 经DNA测序鉴定正确, 成功构建了pSectag2/scFv。将Sectag2/scFv转染CHO细胞后获得目的蛋白表达。SDSPAGE和Western blot检测表明目的蛋白Mr约为34 000。结论: 成功地构建抗scFv真核表达载体pSectag2/scFv, 并在CHO细胞中获得表达, 为人源肝癌scFv的进一步的应用研究提供依据。
【关键词】 肝癌 单链抗体 CHO细胞 基因表达
由于种种原因单克隆抗体(mAb)在进入临床中受到了很大的限制［1］。原因之一是因为动物源性抗体在人体应用时容易诱发HAMA, 产生不良反应［2］。近年来, 逐渐发展的抗体库技术为制备高亲和性的人源抗体提供了有力工具。该技术无需免疫即可制备全人源性抗体, 可有效避HAMA［3］。噬菌体抗体将表型与其基因型之间精确联结, 单链抗体（scFv）可以在预先并不知道细胞表面受体特征的情况下与肿瘤细胞特异性结合而获得, scFv蛋白具有分子小、 穿透力强等优点［4］。本实验室曾利用噬菌体抗体库技术, 构建了全人源肝癌scFv噬菌体库, 并筛选到了1株肝癌特异性scFv［5］, 实现scFv的功能性表达, 进一步鉴定scFv蛋白的功能。我们利用筛选到的基因进行蛋白的真核表达。
1 材料和方法
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