【关键词】  DNA聚合酶β； 转染；食管肿瘤；肿瘤细胞，培养的；抗药性，肿瘤；四甲基偶氮唑蓝

　　DNA聚合酶beta (polymerase beta gene，polβ)广泛存在于哺乳动物细胞核内，是一条Mr为39×103的单肽链小分子蛋白，由355个氨基酸组成，是 目前 已知的最小的DNA聚合酶. 在碱基切除修复，DNA复制，跨损伤合成中发挥重要作用，还与基因组不稳定性有关［1-4 ］. 近年来的 研究 表明在多种肿瘤组织及肿瘤细胞株内polβ  mRNA的表达都明显增加［5-6］. polβ与肿瘤细胞耐药性的关系也逐渐引起人们的注意. 本实验通过研究人食管癌顺铂(concentration of cisplatin, cDDP)耐药细胞系Ec9706/cDDP和稳定高表达人野生型polβ的Ec9706细胞中polβ的表达水平及其对抗肿瘤药cDDP的敏感性，旨在进一步探讨polβ高表达与食管癌细胞耐药的相关性.

　　1材料和 方法

　　1.1材料

　　人食管癌细胞株Ec9706由 中国 医学 科学 院肿瘤研究所提供；cDDP山东齐鲁药业股份有限公司产品；RPMI 1640培养液Gibco/ BRL公司生产；四甲基偶氮唑蓝(MTT)为美国Sigma产品；pEGFPC3 (Clonetech公司)；野生型人polβ重组绿色荧光蛋白表达载体pEGFPAC3(微生物学与免疫学教研室赵国强教授惠赠)；G418(宝生物公司)；6TG (美国Sigma公司)；LipofectamineTM 2000（Invitrogen公司）；引物2对，由上海生工公司合成：polβRNA检测引物：上游5′TGTTTGCCAGCTTCCC AGTA3′，下游5′CTCCA GTGACTCCCAAGGGA3′，扩增长度206 bp；βactin引物:上游5′TC AAGATCATTGCTCCTCCTGA3′，下游5′CTCGTCATACTCCTGCTT GCTG 3′，扩增长度113 bp.

　　1.2方法

　　1.2.1cDDP诱导耐药细胞系Ec9706/cDDP的建立

　　采用cDDP中等浓度、间歇作用方法建株. 以终浓度为2 mg/L的cDDP培养基冲击对数生长期的Ec9706细胞，48 h后弃去含药培养基，PBS洗3次，换新鲜培养基……