论文目录 | |
| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-41页 |
| 1.1 辐射与辐射生物效应 | 第16-21页 |
| 1.1.1 辐射基本概念 | 第16-17页 |
| 1.1.2 辐射生物学效应 | 第17-21页 |
| 1.2 癌症与放疗 | 第21-23页 |
| 1.3 表观遗传调控 | 第23-34页 |
| 1.3.1 Micro RNA | 第24-28页 |
| 1.3.2 组蛋白修饰 | 第28-30页 |
| 1.3.3 DNA甲基化 | 第30-34页 |
| 1.4 表观遗传调控与辐射 | 第34-38页 |
| 1.4.1 Micro RNA与辐射 | 第34-36页 |
| 1.4.2 组蛋白修饰与辐射 | 第36-37页 |
| 1.4.3 DNA甲基化与辐射 | 第37-38页 |
| 1.5 三维细胞培养模型 | 第38-40页 |
| 1.6 本文研究目的及拟解决的问题 | 第40-41页 |
| 第二章 MiR1423p/Bod1通路调控辐射诱导的染色单体过早分离 | 第41-65页 |
| 2.1 前言 | 第41-42页 |
| 2.2 材料与方法 | 第42-50页 |
| 2.2.1 细胞培养条件 | 第42页 |
| 2.2.2 辐照装置和条件 | 第42-43页 |
| 2.2.3 染色体形态分析 | 第43页 |
| 2.2.4 质粒构建 | 第43页 |
| 2.2.5 细胞转染 | 第43-44页 |
| 2.2.6 双荧光素酶报告检测 | 第44页 |
| 2.2.7 RNA提取 | 第44页 |
| 2.2.8 实时荧光定量PCR | 第44-47页 |
| 2.2.9 免疫印迹实验（Western Blot） | 第47-48页 |
| 2.2.10 流式细胞术检测细胞周期 | 第48页 |
| 2.2.11 MTT法检测细胞增殖 | 第48-49页 |
| 2.2.12 克隆形成实验 | 第49页 |
| 2.2.13 微核形成率检测 | 第49-50页 |
| 2.2.14 数据统计分析 | 第50页 |
| 2.3 实验结果 | 第50-62页 |
| 2.3.1 辐射诱导肿瘤细胞染色单体过早分离 | 第50-51页 |
| 2.3.2 MiR1423p与Bod1参与细胞辐射应答 | 第51-52页 |
| 2.3.3 MiR1423p靶向调控Bod1表达 | 第52-53页 |
| 2.3.4 Bod1低表达或miR1423p高表达加剧辐射诱导的染色单体过早分离 | 第53-55页 |
| 2.3.5 Bod1低表达或miR1423p高表达引起细胞G2/M期阻滞 | 第55-56页 |
| 2.3.6 Bod1低表达增加细胞辐射敏感性 | 第56-57页 |
| 2.3.7 MiR1423p高表达增加细胞辐射敏感性 | 第57-58页 |
| 2.3.8 Bod1高表达抑制miR1423p诱导的染色单体过早分离 | 第58-60页 |
| 2.3.9 Bod1高表达抑制辐射诱导的染色单体过早分离并增强细胞辐射抗性 | 第60-62页 |
| 2.3.10 Bod1高表达降低miR1423p细胞辐射增敏效应 | 第62页 |
| 2.4 结论与讨论 | 第62-65页 |
| 第三章 组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET8参与细胞辐射应答 | 第65-83页 |
| 3.1 前言 | 第65-66页 |
| 3.2 材料与方法 | 第66-69页 |
| 3.2.1 细胞培养条件 | 第66页 |
| 3.2.2 辐照装置和条件 | 第66页 |
| 3.2.3 慢病毒构建稳定突变株 | 第66页 |
| 3.2.4 全基因组表达谱测序 | 第66-67页 |
| 3.2.5 免疫荧光实验 | 第67页 |
| 3.2.6 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第67页 |
| 3.2.7 克隆形成实验 | 第67-68页 |
| 3.2.8 MTT法检测细胞增殖 | 第68页 |
| 3.2.9 免疫印迹实验 | 第68页 |
| 3.2.10 RNA提取 | 第68页 |
| 3.2.11 实时荧光定量PCR | 第68页 |
| 3.2.12 质粒构建与转染 | 第68页 |
| 3.2.13 Pull-down检测实验 | 第68页 |
| 3.2.14 Chip-seq检测实验 | 第68-69页 |
| 3.2.15 数据统计分析 | 第69页 |
| 3.3 实验结果 | 第69-81页 |
| 3.3.1 SET8参与细胞辐射应答 | 第69-70页 |
| 3.3.2 SET8干扰序列确定 | 第70页 |
| 3.3.3 SET8-siRNA慢病毒（lentvirus）载体的构建 | 第70-71页 |
| 3.3.4 SET8低表达阻碍DNA修复并增加细胞辐射敏感性 | 第71-73页 |
| 3.3.5 SET8低表达加剧辐射诱导的细胞凋亡 | 第73-74页 |
| 3.3.6 SET8敲低细胞辐射后的全基因转录组测序检测 | 第74-75页 |
| 3.3.7 SET8异常表达对细胞损伤修复关键基因表达的影响 | 第75-77页 |
| 3.3.8 SET8与RNF8表达存在反馈调节关系 | 第77-79页 |
| 3.3.9 Pull-down实验检测H4K20me1特异性结合蛋白 | 第79-80页 |
| 3.3.10 Chip-seq实验检测H4K20me1特异性结合基因序列 | 第80-81页 |
| 3.4 结论与讨论 | 第81-83页 |
| 第四章 RBL1启动子甲基化导致三维（3D）培养细胞辐射抗性 | 第83-116页 |
| 4.1 前言 | 第83-84页 |
| 4.2 材料与方法 | 第84-93页 |
| 4.2.1 细胞培养条件 | 第84页 |
| 4.2.2 免疫荧光实验 (Immunofluorescence) | 第84-85页 |
| 4.2.3 辐照装置和条件 | 第85页 |
| 4.2.4 3D细胞转换成单细胞悬液 | 第85页 |
| 4.2.5 克隆形成实验 | 第85页 |
| 4.2.6 微核形成率检测 | 第85页 |
| 4.2.7 流式细胞术检测细胞周期 | 第85-86页 |
| 4.2.8 RNA提取 | 第86页 |
| 4.2.9 全基因组DNA的提取 | 第86页 |
| 4.2.10 PCR芯片检测基因表达 | 第86-87页 |
| 4.2.11 细胞全基因组甲基化水平检测 | 第87页 |
| 4.2.12 5-Aza-CdR处理细胞 | 第87-88页 |
| 4.2.13 基因启动子甲基化PCR芯片分析 | 第88-90页 |
| 4.2.14 甲基化特异性PCR（MSP） | 第90-92页 |
| 4.2.15 琼脂糖凝胶电泳 | 第92页 |
| 4.2.16 实时荧光定量PCR | 第92页 |
| 4.2.17 免疫印迹实验 | 第92-93页 |
| 4.2.18 质粒构建与转染 | 第93页 |
| 4.2.19 数据统计分析 | 第93页 |
| 4.3 实验结果 | 第93-114页 |
| 4.3.1 3D细胞形态学特征 | 第93-94页 |
| 4.3.2 3D结构细胞表达有人体组织样标志物 | 第94-96页 |
| 4.3.3 3D培养细胞具有辐射抗性 | 第96-97页 |
| 4.3.4 辐射诱导的 3D细胞G2/M期阻滞低于 2D细胞 | 第97-98页 |
| 4.3.5 2D与 3D细胞中周期调控基因差异表达 | 第98-101页 |
| 4.3.6 2D与 3D细胞中RBL1、CCND1、CCNF差异表达明显 | 第101-102页 |
| 4.3.7 2D与 3D细胞全基因组DNA甲基化水平存在差异 | 第102-103页 |
| 4.3.8 2D与 3D细胞中周期调控基因启动子甲基化水平存在差异 | 第103-105页 |
| 4.3.9 辐射或 5-Aza-CdR对 2D与 3D细胞中RBL1的启动子甲基化影响 | 第105-106页 |
| 4.3.10 辐射或 5-Aza-CdR对 2D与 3D细胞中RBL1的表达影响 | 第106-107页 |
| 4.3.11 5-Aza-CdR联合辐射诱导 3D细胞更为严重的G2/M期阻滞 | 第107-108页 |
| 4.3.12 RBL1低表达导致 2D细胞中辐射诱导的G2/M期阻滞程度降低 | 第108-110页 |
| 4.3.13 RBL1低表达增加 2D细胞辐射抗性 | 第110-111页 |
| 4.3.14 RBL1高表达降低 2D细胞辐射抗性 | 第111-112页 |
| 4.3.15 RBL1高表达降低 3D细胞辐射抗性 | 第112-113页 |
| 4.3.16 RBL1低表达增加 3D细胞辐射抗性 | 第113-114页 |
| 4.4 讨论与分析 | 第114-116页 |
| 第五章 结论与展望 | 第116-118页 |
| 5.1 结论 | 第116页 |
| 5.2 展望 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-139页 |
| 个人简历 | 第139-140页 |
| 在学研究成果 | 第140-142页 |
