论文目录 | |
| 缩略语表 | 第1-10
页 |
| 中文摘要 | 第10-13
页 |
| ABSTRACT | 第13-16
页 |
| 前言 | 第16-17
页 |
| 文献回顾 | 第17-31
页 |
| 一、CDK2AP1 基因的结构特征及表达 | 第17-21
页 |
| 二、P12~(CDK2AP1)的作用机理 | 第21-26
页 |
| 三、P12~(CDK2AP1)国内研究现状 | 第26-28
页 |
| 四、MIRNAS调控基因表达的研究进展 | 第28-31
页 |
| 正文 | 第31-104
页 |
| 第一部分 CDK2AP1 基因RNAI 慢病毒载体的构建及相关验证 | 第31-83
页 |
| 实验一 CDK2AP1 基因RNA 干扰慢病毒载体制备 | 第31-44
页 |
| 1 材料 | 第31-33
页 |
| · 实验材料 | 第31
页 |
| · 主要仪器设备和试剂 | 第31-33
页 |
| 2 方法 | 第33-39
页 |
| · 载体构建流程图 | 第33
页 |
| · 慢病毒载体构建步骤 | 第33-39
页 |
| 3 结果 | 第39-44
页 |
| · 琼脂糖凝胶电泳 | 第39-42
页 |
| · 阳性克隆测序结果分析 | 第42-44
页 |
| 实验二 RNAI慢病毒小量包装 | 第44-52
页 |
| 1 材料 | 第44-45
页 |
| · 实验材料 | 第44
页 |
| · 主要仪器设备和试剂 | 第44-45
页 |
| 2 方法 | 第45-49
页 |
| · 慢病毒包装流程图 | 第45
页 |
| · 病毒包装细胞293T 的培养 | 第45-46
页 |
| · Lentivirus 病毒包装 | 第46-47
页 |
| · 病毒的收获及浓缩 | 第47-48
页 |
| · Lentivirus 滴度测定 | 第48-49
页 |
| 3 实验结果 | 第49-52
页 |
| · 滴度照片 | 第49-51
页 |
| · 滴度测定结果 | 第51-52
页 |
| 实验三 QPCR 内源筛选靶点 | 第52-65
页 |
| 1 材料 | 第52-53
页 |
| · 实验材料 | 第52
页 |
| · 主要仪器设备和试剂 | 第52-53
页 |
| 2 方法 | 第53-58
页 |
| · 筛靶流程图 | 第53
页 |
| · 实验设计 | 第53-54
页 |
| · 实验步骤 | 第54-58
页 |
| 3 实验结果 | 第58-65
页 |
| · 慢病毒感染效果测定 | 第58-60
页 |
| · Quantitative Real-time PCR 数值分析 | 第60-62
页 |
| · 有效靶点病毒包装滴度 | 第62-65
页 |
| 实验四 QPCR 内源验证靶点有效性 | 第65-71
页 |
| 1 材料 | 第65-66
页 |
| · 实验材料 | 第65
页 |
| · 主要仪器设备和试剂 | 第65-66
页 |
| 2 方法 | 第66-68
页 |
| · 靶点验证流程图 | 第66
页 |
| · 实验设计 | 第66-67
页 |
| · 实验步骤 | 第67
页 |
| · 统计方法 | 第67-68
页 |
| 3 实验结果 | 第68-71
页 |
| · 荧光照片 | 第68
页 |
| · Quantitative Real-time PCR 数值分析 | 第68-71
页 |
| 实验五 WB 内源验证及生物学效应 | 第71-80
页 |
| 1 材料 | 第71-72
页 |
| · 实验材料 | 第71
页 |
| · 主要仪器设备和试剂 | 第71-72
页 |
| 2 方法 | 第72-78
页 |
| · WB 验证靶点流程图 | 第72
页 |
| · 实验设计 | 第72-73
页 |
| · 实验步骤 | 第73-78
页 |
| 3 实验结果 | 第78-80
页 |
| · CDK2AP1 mRNA 表达水平明显降低 | 第78
页 |
| · Western Blot | 第78-79
页 |
| · P12~(CDK2AP1) 下调后促进细胞的增殖能力 | 第79-80
页 |
| 讨论 | 第80-83
页 |
| 第二部分 MIR-21 下调肿瘤抑制因子P12~(CDK2AP1)表达的体外研究 | 第83-104
页 |
| 实验一 CDK2AP1 基因相互作用MIRNAS的预测与验证 | 第83-88
页 |
| 1 材料 | 第83-84
页 |
| · 实验材料 | 第83
页 |
| · 主要仪器设备和试剂 | 第83-84
页 |
| 2 方法 | 第84-86
页 |
| · 靶点预测的权威生物学软件 | 第84-85
页 |
| · 预测miRNAs 的筛选 | 第85
页 |
| · 预测靶点的验证 | 第85-86
页 |
| 3 结果 | 第86-88
页 |
| · 生物信息学软件预测靶点 | 第86
页 |
| · 报告基因系统验证作用靶点 | 第86-88
页 |
| 实验二 P12~(CDK2AP1)与MIR-21 在细胞系中内源性表达检测及二者关系探讨 | 第88-93
页 |
| 1 材料 | 第88-89
页 |
| · 实验材料 | 第88
页 |
| · 主要仪器设备和试剂 | 第88-89
页 |
| 2 方法 | 第89-90
页 |
| · 引物设计 | 第89
页 |
| · 实验步骤 | 第89-90
页 |
| 3 结果 | 第90-93
页 |
| · P12~(CDK2AP1) 与miR-21 内源性表达情况 | 第90-92
页 |
| · miR-21 下调P12~(CDK2AP1) 的表达 | 第92-93
页 |
| 实验三 MIR-21 对细胞侵袭和增殖能力的影响 | 第93-101
页 |
| 1 材料 | 第93-94
页 |
| · 实验材料 | 第93
页 |
| · 主要仪器设备和试剂 | 第93-94
页 |
| 2 方法 | 第94-98
页 |
| · 实验步骤 | 第94-98
页 |
| 3 结果 | 第98-101
页 |
| · Transwell 侵袭实验 | 第98
页 |
| · 平板克隆形成实验 | 第98-99
页 |
| · MTT 检测 | 第99
页 |
| · 细胞周期检测 | 第99-101
页 |
| 讨论 | 第101-104
页 |
| 小结 | 第104-106
页 |
| 参考文献 | 第106-110
页 |
| 个人简历和研究成果 | 第110-112
页 |
| 致谢 | 第112
页 |
