论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-15
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| ABSTRACT | 第15-20
页 |
| 第一章 绪论 | 第20-44
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| · 前言 | 第20
页 |
| · 糖生物学的发展 | 第20-21
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| · 寡糖的制备技术 | 第21-24
页 |
| · 化学合成法 | 第21-22
页 |
| · 多糖降解法 | 第22-24
页 |
| · 酶法合成寡糖技术 | 第24
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| · 利用重组大肠细菌进行寡糖合成的研究进展 | 第24-34
页 |
| · 细菌糖基转移酶的来源及克隆 | 第25
页 |
| · 糖核苷酸的供给 | 第25-29
页 |
| · 寡糖合成途径的构建 | 第29-33
页 |
| · 研发前景及存在的问题 | 第33-34
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| · 结瘤因子的活性及其生物合成 | 第34-39
页 |
| · 根瘤菌的分类及豆科植物的固氮机理 | 第34
页 |
| · 结瘤因子的结构及其生物合成 | 第34-37
页 |
| · NodC蛋白的研究进展 | 第37-38
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| · NodB蛋白的研究进展 | 第38-39
页 |
| · UDP-GlcNAc在细菌细胞内的代谢途径 | 第39-40
页 |
| · 立题依据和研究意义 | 第40-43
页 |
| · 立题依据 | 第40-42
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| · 本论文研究的意义 | 第42-43
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| · 论文的主要研究内容和拟解决的关键问题 | 第43-44
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| · 研究内容 | 第43
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| · 拟解决的关键问题 | 第43-44
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| 第二章 重组nodC基因的克隆和表达载体的构建与筛选 | 第44-71
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| · 引言 | 第44
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| · 试验材料 | 第44-52
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| · 菌株 | 第44-45
页 |
| · 基因、质粒和引物 | 第45-50
页 |
| · 分子克隆用酶和试剂 | 第50-51
页 |
| · 培养基 | 第51
页 |
| · 溶液 | 第51-52
页 |
| · 主要仪器 | 第52-53
页 |
| · 试验及分析方法 | 第53-58
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| · 根瘤菌基因组的提取 | 第53
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| · 目的基因的琼脂糖凝胶回收 | 第53-54
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| · 目的基因与载体的限制性内切酶消化反应 | 第54-55
页 |
| · 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第55
页 |
| · 目的基因与载体的连接反应 | 第55
页 |
| · 大肠杆菌转化试验 | 第55-56
页 |
| · 重组大肠杆菌的三角瓶振荡培养 | 第56
页 |
| · 培养液和重组大肠杆菌细胞中几丁寡糖含量的测定 | 第56-57
页 |
| · 重组大肠杆菌培养液细胞干重含量的测定和计算 | 第57-58
页 |
| · 结果与讨论 | 第58-69
页 |
| · 不同大肠杆菌菌株对几丁寡糖合成的影响 | 第58-60
页 |
| · 重组nodCL基因克隆 | 第60-63
页 |
| · 不同nodCL表达载体的产糖能力的测定结果 | 第63-66
页 |
| · NodCM表达载体pUC-CM3的构建 | 第66-68
页 |
| · 重组nodC基因对寡糖合成的影响 | 第68-69
页 |
| · 本章小结 | 第69-71
页 |
| 第三章 利用重组大肠杆菌合成几丁寡糖的研究 | 第71-97
页 |
| · 引言 | 第71-72
页 |
| · 试验材料 | 第72-73
页 |
| · 菌株 | 第72
页 |
| · 培养基 | 第72-73
页 |
| · 主要试验试剂 | 第73
页 |
| · 主要试验仪器 | 第73-75
页 |
| · 试验及分析方法 | 第75-80
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| · 重组大肠杆菌的三角瓶振荡培养 | 第75
页 |
| · 10 L发酵罐非补料模式的培养方式 | 第75
页 |
| · 10 L发酵罐补料模式的同步法培养方式 | 第75
页 |
| · 10 L发酵罐补料模式的二步法培养方式 | 第75-76
页 |
| · 培养液中重组大肠杆菌细胞干重的测定方法 | 第76
页 |
| · 培养液上清中N-乙酰氨基葡萄糖含量的测定 | 第76
页 |
| · 重组大肠杆菌细胞内几丁寡糖浓度的测定方法 | 第76
页 |
| · 重组大肠杆菌培养液中UDP-GlcNAc浓度的测定 | 第76-78
页 |
| · 寡糖产物的分离纯化及产物鉴定 | 第78-80
页 |
| · 结果与讨论 | 第80-93
页 |
| · 培养基组分对重组大肠杆菌生长和几丁寡糖合成的影响 | 第80-81
页 |
| · 不同乙酰氨基葡萄糖添加水平的培养结果 | 第81-82
页 |
| · 不同培养基对细胞内UDP-GlcNAc浓度的影响 | 第82-84
页 |
| · DCL3的同步法发酵结果 | 第84-86
页 |
| · DCL3的二步法发酵结果 | 第86-87
页 |
| · 几丁寡糖产物的分离纯化鉴定 | 第87-93
页 |
| · 本章小结 | 第93-97
页 |
| 第四章 利用重组NodC大肠杆菌合成几丁寡糖衍生物的研究 | 第97-115
页 |
| · 引言 | 第97
页 |
| · 材料和方法 | 第97-101
页 |
| · 菌株 | 第97
页 |
| · 主要实验仪器与试剂 | 第97-98
页 |
| · 培养基 | 第98
页 |
| · 试验方法 | 第98-101
页 |
| · 结果与讨论 | 第101-113
页 |
| · 几丁寡糖烯丙基衍生物合成的发酵培养结果 | 第101-102
页 |
| · 几丁寡糖甲基衍生物合成的发酵培养结果 | 第102-103
页 |
| · 培养液测定结果 | 第103-105
页 |
| · 活性炭吸附洗脱的纯化试验结果 | 第105-106
页 |
| · P-4凝胶层析纯化结果 | 第106-107
页 |
| · 几丁寡糖产物的HPLC分析结果 | 第107-109
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| · 制备液相分离纯化结果 | 第109
页 |
| · 制备色谱分离组分的几丁寡糖含量的测定结果 | 第109-110
页 |
| · TLC层析结果 | 第110
页 |
| · ESI-MS分析结果 | 第110-113
页 |
| · NMR分析结果 | 第113
页 |
| · 本章小结 | 第113-115
页 |
| 第五章 重组去乙酰基水解酶(nodBprotein)的表达及其活性鉴定 | 第115-133
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| · 引言 | 第115
页 |
| · 试验菌株 | 第115
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| · 主要试验材料 | 第115-116
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| · 主要实验仪器 | 第116
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| · 培养基 | 第116-117
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| · 试验方法 | 第117-126
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| · 试验操作流程 | 第117
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| · 根瘤菌的培养及基因组 | 第117
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| · 重组nodB基因的克隆及表达载体的构建 | 第117-122
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| · 重组大肠杆菌的诱导表达 | 第122
页 |
| · 目的蛋白的大量制备 | 第122-123
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| · 包含体的处理 | 第123
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| · 亲和层析纯化重组NodB蛋白 | 第123-124
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| · 重组NodB蛋白贮存液的制备 | 第124
页 |
| · NodB酶解体系 | 第124
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| · 酶解寡糖产物的分离纯化 | 第124-125
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| · 分析方法 | 第125-126
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| · 结果与讨论 | 第126-131
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| · 重组nodB基因表达载体的构建及转化结果 | 第126
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| · 酶切鉴定结果 | 第126-128
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| · 重组NodB蛋白的诱导表达结果 | 第128-131
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| · 本章小结 | 第131-133
页 |
| 第六章 论文总结 | 第133-138
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| · 取得的研究结果 | 第133-136
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| · 结果讨论 | 第136-138
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| References | 第138-146
页 |
| 在读期间论文及专利 | 第146-147
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| 致谢 | 第147-148
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| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第148-149
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| 附录 | 第149-167
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