利用转基因技术创造适合纤维素乙醇生产的玉米新材料



利用转基因技术创造适合纤维素乙醇生产的玉米新材料

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利用转基因技术创造适合纤维素乙醇生产的玉米新材料

论文目录
中文摘要	第1-13页
Abstract	第13-20页
符号说明	第20-21页
第一章前言	第21-47页
· 生物质能源的兴起	第21-28页
· 能源危机	第21-22页
· 生物乙醇发展概况	第22-23页
· 粮食淀粉和糖类作物制取燃料乙醇	第23-24页
· 木质纤维素制取燃料乙醇	第24-28页
· 木质纤维素	第24-27页
· 制约木质纤维素制取燃料乙醇的关键问题	第27-28页
· 利用转基因技术促进木质纤维素有效利用	第28-41页
· 纤维素降解与纤维素酶生产	第29-36页
· 纤维素降解与纤维素酶	第29-32页
· 纤维素酶的异源表达	第32-36页
· 在细菌中表达纤维素酶	第32-33页
· 酵母表达系统	第33页
· 丝状真菌中表达纤维素酶	第33-34页
· 转基因植物	第34-36页
· 木质素生物合成及其遗传改良	第36-41页
· 木质素组成与分布	第36-38页
· 木质素生物合成途径	第38-40页
· 木质素合成的遗传改良	第40-41页
· 异源纤维素酶基因表达和木质素含量降低对转基因植物的影响	第41-45页
· 异源纤维素酶基因表达对转基因植物的影响	第41-43页
· 降低木质素含量对转基因植物的影响	第43-45页
· 木质素总量合成的生物调控	第43-44页
· 木质素单体特异合成相关酶的合成调控	第44-45页
· 本工作的目的和意义	第45-47页
第二章乙醇诱导启动子的克隆	第47-63页
· 材料	第49页
· 菌株和质粒载体	第49页
· 药品及试剂	第49页
· 方法	第49-57页
· 构巢曲霉基因组DNA的提取	第49-50页
· alcA启动子的克隆	第50-52页
· 引物设计和PCR反应	第50-51页
· PCR产物的回收,克隆和测序	第51-52页
· 构巢曲霉总RNA的提取及cDNA合成	第52-53页
· 总RNA的提取	第52页
· mRNA的分离	第52-53页
· cDNA合成	第53页
· 转录因子alcR的克隆	第53-54页
· 含有乙醇诱导启动子的植物表达载体的构建	第54-56页
· 质粒DNA的制备和纯化	第54页
· 质粒DNA的限制性酶切	第54页
· DNA片段的去磷酸化	第54页
· DNA片段的回收和定量	第54页
· DNA片段的补平加A反应	第54-55页
· 目的DNA片段与载体DNA的连接	第55页
· 大肠杆菌感受态的制备和转化	第55页
· 重组质粒的鉴定	第55页
· 重组质粒转入农杆菌	第55-56页
· 报告基因的瞬时表达分析	第56-57页
· 实验材料	第56页
· 培养基和试剂	第56页
· 利用基因枪转化玉米胚芽鞘	第56-57页
· GUS组织化学检测	第57页
· 结果与分析	第57-61页
· 构巢曲霉DNA的提取和alcA片段的克隆	第57-59页
· 构巢曲霉RNA的提取及转录因子alcR的克隆	第59页
· 含有乙醇诱导启动子的植物表达载体的构建与鉴定	第59-61页
· 基因枪轰击玉米胚芽鞘	第61页
· 讨论	第61-63页
第三章真菌纤维素酶基因CBHⅠ和EGⅢ在转基因玉米中表达	第63-96页
· 材料与方法	第64-76页
· 材料	第64-65页
· 植物材料	第64页
· 菌株和质粒	第64-65页
· 药品和试剂	第65页
· 方法	第65-76页
· 瑞士木霉总RNA的提取及cDNA合成	第65-66页
· Trizol试剂提取瑞士木霉总RNA	第65-66页
· 反转录	第66页
· 纤维素酶基因的克隆	第66页
· PCR去除纤维素酶基因的信号肽	第66-67页
· 植物表达载体的构建	第67页
· 农杆菌介导的玉米芽尖的遗传转化	第67-68页
· 用于玉米转化的培养基	第67页
· 重组质粒转入农杆菌	第67页
· 玉米转化受体的准备	第67-68页
· 农杆菌培养和玉米无菌苗转化	第68页
· 转化植株的筛选与定植	第68页
· 转基因玉米植株后代的遗传学分析	第68-69页
· 转基因玉米的分子生物学检测	第69-73页
· PCR检测	第69-70页
· Southern杂交检测	第70-72页
· Real-time RT-PCR检测	第72-73页
· 酒精诱导条件	第73-74页
· 纤维素酶活性测定	第74页
· 转基因玉:米植株中纤维素酶酶学特性的分析	第74-75页
· 纤维素含量测定	第75页
· 纤维素酶解实验	第75-76页
· 试验设计与数据处理	第76页
· 结果与分析	第76-92页
· 纤维素酶基因的克隆	第76页
· 植物表达载体的构建与鉴定	第76-79页
· 转基因玉米的获得	第79-82页
· 转CBHⅠ基因玉米植株乙醇诱导活性的初步鉴定	第82-84页
· 不同酒精诱导浓度对alc系统诱导活性的影响	第84页
· 不同酒精诱导时间对alc系统诱导活性的影响	第84-85页
· 持续酒精诱导的影响	第85-86页
· 转CBHⅠ基因玉米不同组织部位的表达情况	第86页
· 转EGⅢ基因的玉米植株中基因表达情况检测	第86-87页
· pH值和温度对转基因玉米中酶活性的影响	第87-89页
· 不同温度储存对转基因植株叶片酶活性的影响	第89页
· 纤维素含量的测定	第89-90页
· 纤维素酶解试验	第90-91页
· 转基因玉米植株的生长发育	第91-92页
· 讨论	第92-96页
第四章利用RNAi技术抑制玉米木质素合成基因CAD和CCR基因的表达	第96-118页
· 材料与方法	第96-102页
· 材料	第96-97页
· 植物材料	第96页
· 菌株和质粒	第96页
· 试剂和药品	第96-97页
· 实验方法	第97-102页
· 玉米总RNA的提取及cDNA的合成	第97页
· 玉米肉桂醇脱氢酶基因(CAD)和肉桂酰辅酶A还原酶基因(CCR)的克隆	第97页
· RNAi结构表达载体的构建	第97-98页
· 农杆菌介导的玉米芽尖的遗传转化和分子检测	第98-100页
· 酶活测定方法	第100页
· 木质素含量的测定	第100-101页
· 综纤维素含量的测定	第101页
· 可溶性总酚含量的测定	第101页
· 可溶性总糖测定	第101-102页
· 试验设计与数据处理	第102页
· 结果与分析	第102-114页
· 玉米CAD基因和CCR基因的克隆	第102-103页
· RNAi结构的构建与鉴定	第103-104页
· 转RNAi结构玉米的分子检测	第104-106页
· 转RNAi结构玉米植株的遗传学分析	第106-107页
· 目标基因表达强度的检测	第107-108页
· 转RNAi结构玉米植株酶活性测定	第108-109页
· 木质素含量测定	第109-110页
· 综纤维素含量测定	第110页
· 可溶性总酚含量测定	第110-111页
· 可溶性糖含量测定	第111-112页
· 玉米木质素合成相关基因在转基因玉米中的表达分析	第112页
· 转RNAi结构玉米植株的生长发育	第112-114页
· 讨论	第114-118页
第五章总结与展望	第118-122页
· 过表达微生物来源纤维素酶基因玉米的利用价值	第118-119页
· 利用RNAi技术干扰玉米木质素合成	第119-120页
· 本工作的创新点	第120-121页
· 展望	第121-122页
参考文献	第122-135页
致谢	第135-136页
攻读学位期间发表的学术论文目录	第136-137页
学位论文评阅及答辩情况表	第137 页

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