论文目录 | |
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-19页 |
| 前言 | 第19-43页 |
| 1 蛋白 O-GlcNAc 修饰的生物合成 | 第20-27页 |
| · 己糖胺生物合成途径（Hexosamine Biosynthetic Pathway-HBP） | 第21-22页 |
| · O-GlcNAc 糖基转移酶（OGT） | 第22-25页 |
| · O-GlcNAcase（OGA） | 第25-27页 |
| 2 O-GlcNAc 修饰的检测方法 | 第27-29页 |
| · 植物凝集素法 | 第27页 |
| · 半乳糖基转移酶标记法 | 第27-28页 |
| · 代谢标记法 | 第28页 |
| · 抗体法 | 第28-29页 |
| · Mass Tag 法检测O-GlcNAc 修饰 | 第29页 |
| 3 O-GlcNAc 修饰对蛋白质磷酸化修饰的影响 | 第29-32页 |
| 4 O-GlcNAc 修饰对蛋白质功能的调节 | 第32-35页 |
| · O-GlcNAc 修饰对蛋白质降解调节 | 第32-33页 |
| · O-GlcNAc 修饰对蛋白质相互作用的影响 | 第33-34页 |
| · O-GlcNAc 修饰对蛋白质在细胞定位的影响 | 第34页 |
| · O-GlcNAc 修饰对酶活性调节 | 第34-35页 |
| 5 O-GlcNAc 修饰发挥的生物学功能 | 第35-39页 |
| · O-GlcNAc 修饰与细胞生存能力 | 第35-36页 |
| · O-GlcNAc 修饰对细胞周期的影响 | 第36-37页 |
| · O-GlcNAc 修饰与外界营养感应器 | 第37-38页 |
| · O-GlcNAc 修饰与压力应激 | 第38-39页 |
| 6 O-GlcNAc 与疾病 | 第39-43页 |
| · O-GlcNAc 与糖尿病 | 第39-40页 |
| · O-GlcNAc 与神经退行性疾病 | 第40-41页 |
| · O-GlcNAc 与肿瘤 | 第41-43页 |
| 第一章 O-GlcNAc 修饰与肿瘤发生有正相关性 | 第43-54页 |
| 第一节 乳腺癌与肺癌组织中 O-GlcNAc 修饰水平增加 | 第44-49页 |
| 1 实验材料 | 第44页 |
| · 组织芯片 | 第44页 |
| · 主要试剂 | 第44页 |
| 2 主要仪器 | 第44页 |
| 3 实验方法 | 第44-45页 |
| · 免疫组化步骤 | 第44-45页 |
| · 染色强度计算方法 | 第45页 |
| 4 实验结果 | 第45-47页 |
| · 人的乳腺癌与其癌旁组织中O-GlcNAc 修饰的检测 | 第45-46页 |
| · 人肺癌与其癌旁组织中O-GlcNAc 修饰的检测 | 第46-47页 |
| 5 讨论 | 第47-49页 |
| 6 小结 | 第49页 |
| 第二节 OGT 和 OGA 在乳腺癌与肺癌中的表达 | 第49-54页 |
| 1 实验材料 | 第49页 |
| · 组织芯片 | 第49页 |
| · 主要试剂 | 第49页 |
| 2 主要仪器 | 第49-50页 |
| 3 实验方法 | 第50页 |
| · 免疫组化步骤 | 第50页 |
| · 染色强度计算方法 | 第50页 |
| 4 实验结果 | 第50-52页 |
| · 人的肺癌和乳腺癌与其癌旁组织中OGT 表达的检测 | 第50-51页 |
| · 人的肺癌和乳腺癌OGA 表达的检测 | 第51-52页 |
| 5 讨论 | 第52-53页 |
| 6 小结 | 第53-54页 |
| 第二章 O-GlcNAc 在肿瘤发生与转移过程中的作用 | 第54-76页 |
| 第一节 O-GlcNAc 修饰表达减少和增加细胞株的构建 | 第55-67页 |
| 1 实验材料 | 第55页 |
| · 细胞株 | 第55页 |
| · 菌种和载体 | 第55页 |
| 2 主要仪器 | 第55页 |
| 3 实验方法 | 第55-61页 |
| · RNAi 载体的构建 | 第55-58页 |
| · 构建沉默细胞株 | 第58-61页 |
| 4 实验结果 | 第61-67页 |
| · OGT 基因沉默细胞株 | 第61页 |
| · 实时荧光定量PCR 检测沉默细胞株中OGT 的表达 | 第61-62页 |
| · WB 检测沉默细胞株OGT 蛋白表达 | 第62-63页 |
| · O-GlcNAc 修饰水平的检测 | 第63-65页 |
| · O-GlcNAc 修饰增加的细胞株的构建 | 第65-67页 |
| 5 讨论 | 第67页 |
| 6 小结 | 第67页 |
| 第二节 O-GlcNAc 修饰在肿瘤发生与转移中作用 | 第67-76页 |
| 1 实验材料 | 第67-68页 |
| · 细胞株 | 第67-68页 |
| · 实验小鼠 | 第68页 |
| 2 主要仪器 | 第68页 |
| 3 实验方法 | 第68-69页 |
| · 细胞增殖的测定 | 第68页 |
| · 细胞克隆形成能力检测 | 第68页 |
| · 细胞迁移能力的检测 | 第68页 |
| · 肿瘤形成和转移实验 | 第68页 |
| · 转移癌组织芯片 | 第68页 |
| · 实验数据 | 第68-69页 |
| 4 结果 | 第69-73页 |
| · O-GlcNAc 修饰对肿瘤细胞增殖的影响 | 第69页 |
| · O-GlcNAc 修饰对肿瘤细胞克隆形成能力的作用 | 第69-70页 |
| · O-GlcNAc 修饰体外迁移的作用 | 第70-71页 |
| · O-GlcNAc 修饰对小鼠乳腺癌细胞4T1 形成肿瘤能力的影响 | 第71页 |
| · O-GlcNAc 对小鼠乳腺癌细胞4T1 肺转移的作用 | 第71-72页 |
| · 组织芯片验证乳腺癌转移淋巴结癌与原位癌O-GlcNAc 修饰 | 第72-73页 |
| 5 讨论 | 第73-75页 |
| 6 小结 | 第75-76页 |
| 第三章 O-GlcNAc 修饰影响肿瘤发生和转移分子机制的研究 | 第76-108页 |
| 第一节 O-GlcNAc 修饰对 E-cadherin 表达调节 | 第78-87页 |
| 1 实验材料 | 第78-79页 |
| · 细胞株 | 第78页 |
| · 试剂 | 第78-79页 |
| · 载体 | 第79页 |
| 2 主要仪器 | 第79页 |
| 3 实验方法 | 第79-81页 |
| · 细胞与细胞间相对黏附能力的检测 | 第79-80页 |
| · 实时荧光定量PCR | 第80页 |
| · E-caherin 降解速度检测 | 第80页 |
| · 抽提细胞骨架的方法 | 第80页 |
| · 免疫沉淀和WB | 第80-81页 |
| · 激光共聚焦实验 | 第81页 |
| 4 实验结果 | 第81-86页 |
| · O-GlcNAc 对肿瘤细胞黏附的影响 | 第81-82页 |
| · O-GlcNAc 对E-cadherin、β-catenin 和P120 表达的影响 | 第82-85页 |
| · O-GlcNAc 对E-cadherin 转录的影响 | 第85页 |
| · O-GlcNAc 对E-cadherin 蛋白稳定性的影响 | 第85-86页 |
| 5 讨论 | 第86-87页 |
| 6 小结 | 第87页 |
| 第二节 O-GlcNAc 通过抑制 E-cadherin 表达促进肿瘤发生与转移 | 第87-98页 |
| 1 实验材料 | 第87-88页 |
| · 细胞株与实验动物 | 第87-88页 |
| · 主要试剂 | 第88页 |
| 2 方法 | 第88-89页 |
| · pLKO.1-hygro 载体的构建 | 第88页 |
| · E-cadherin shRNA 表达载体的构建 | 第88-89页 |
| · 构建E-cadherin 基因沉默细胞株 | 第89页 |
| · E-cadherin 基因和OGT 基因双沉默细胞株的构建 | 第89页 |
| 3 实验结果 | 第89-97页 |
| · 鉴定PLKO.1-hygro 载体 | 第89-90页 |
| 3.2 检测 E-cadherin 沉默细胞株 | 第90-91页 |
| · 构建E-cadherin 基因和OGT 基因双沉默细胞株 | 第91-92页 |
| · E-cadherin 减少促进肿瘤细胞迁移 | 第92-93页 |
| · O-GlcNAc 修饰通过抑制E-cadherin 表达促进癌细胞体外迁移 | 第93-95页 |
| · O-GlcNAc 修饰通过抑制E-cadherin 表达促进4T1 细胞体内肺转移过程 | 第95-97页 |
| 4 讨论 | 第97页 |
| 5 小结 | 第97-98页 |
| 第三节 O-GlcNAc 促进 E-cadherin 降解分子机制的探讨 | 第98-108页 |
| 1 实验材料 | 第98页 |
| · 细胞株 | 第98页 |
| · 试剂 | 第98页 |
| 2 实验方法 | 第98-99页 |
| · 免疫沉淀 | 第98页 |
| · E-cadherin 修饰N 聚糖链的去除 | 第98-99页 |
| · 蛋白的糖基化检测 | 第99页 |
| · 蛋白的磷酸化检测 | 第99页 |
| 3 实验结果 | 第99-106页 |
| · E-cadherin、β-catenin 和P120 蛋白O-GlcNAc 修饰的检测 | 第99-104页 |
| · O-GlcNAc 对E-cadherin 蛋白磷酸化的影响 | 第104-105页 |
| · O-GlcNAc 对E-cadherin 和β-catenin 相互作用的影响 | 第105页 |
| · O-GlcNAc 对E-cadherin 和P120 相互作用的影响 | 第105-106页 |
| 4 讨论 | 第106页 |
| 5 小结 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-127页 |
| 个人简历 | 第127-128页 |
| 发表论文 | 第128-129页 |
| 致谢 | 第129
页 |
