论文目录 | |
| 内容提要 | 第1-5
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| 英文缩略词 | 第5-10
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| 前言 | 第10-11
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| 第1章 绪论 | 第11-35
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| · 肿瘤诱导分化治疗 | 第11-23
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| · 诱导分化疗法的提出、发展及意义 | 第11-12
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| · 诱导分化剂 | 第12-17
页 |
| · 诱导分化剂作用机制 | 第17-19
页 |
| · 肝癌细胞诱导分化研究进展 | 第19-21
页 |
| · 诱导分化疗法在临床中的应用 | 第21-23
页 |
| · OSM | 第23-34
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| · OSM基因与蛋白质结构 | 第23-24
页 |
| · OSM受体与信号传导通路 | 第24-27
页 |
| · OSM生物学功能研究进展 | 第27-33
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| · OSM临床应用前景 | 第33-34
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| · 立题依据 | 第34-35
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| 第2章 rhOSM毕赤酵母高效分泌表达体系的建立 | 第35-50
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| · 材料与方法 | 第35-43
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| · 器材及设备 | 第35-36
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| · 主要试剂 | 第36
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| · 质粒和菌株 | 第36
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| · 转化毕赤酵母菌 | 第36-37
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| · 阳性菌株的筛选 | 第37-38
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| · 表达产物rhOSM分析 | 第38-40
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| · AKTA explorer多功能纯化系统小量纯化rhOSM | 第40-41
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| · rhOSM质谱分析 | 第41
页 |
| · rhOSM氨基酸序列分析 | 第41-43
页 |
| · 结果 | 第43-47
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| · rhOSM毕赤酵母工程菌的筛选 | 第43-45
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| · rhOSM小量纯化 | 第45
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| · 质谱测定rhOSM相对分子质量 | 第45
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| · rhOSM的N-端氨基酸序列分析 | 第45-47
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| · 讨论 | 第47-50
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| 第3章 rhOSM中试规模发酵及纯化工艺研究 | 第50-68
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| · 材料与方法 | 第50-58
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| · 器材及设备 | 第50-51
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| · 主要试剂 | 第51
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| · 细胞株 | 第51
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| · 溶液配制 | 第51-53
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| · 毕赤酵母表达rhOSM的pH值优化 | 第53
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| · 毕赤酵母中试规模表达rhOSM条件的优化 | 第53-55
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| · rhOSM大规模纯化系统的建立 | 第55-57
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| · Bradford法定量rhOSM | 第57
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| · MTT比色法测定rhOSM活性 | 第57
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| · 结果处理及统计学分析 | 第57-58
页 |
| · 结果 | 第58-65
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| · 毕赤酵母表达rhOSM pH值的优化 | 第58
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| · rhOSM中试规模发酵条件优化 | 第58-62
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| · rhOSM大规模纯化 | 第62-63
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| · rhOSM活性测定 | 第63-65
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| · 讨论 | 第65-68
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| 第4章 rhOSM体外诱导肝癌细胞分化的实验研究 | 第68-95
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| · 材料与方法 | 第68-77
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| · 主要仪器和器材 | 第68-69
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| · 主要试剂 | 第69-70
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| · 细胞株 | 第70
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| · 液体配制 | 第70
页 |
| · SMMC-7721 细胞的复苏、传代及冻存 | 第70-71
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| · RT-PCR法鉴定OSMR及OSM在SMMC-7721 细胞中的表达 | 第71-72
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| · rhOSM对SMMC-7721 细胞增殖抑制作用的检测 | 第72-73
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| · rhOSM对SMMC-7721 细胞周期及凋亡率的影响 | 第73
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| · 免疫荧光细胞化学法检测信号传导分子STAT3 的活化 | 第73-74
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| · rhOSM对SMMC-7721 细胞形态与超微结构的影响 | 第74-75
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| · 免疫细胞化学染色法检测细胞内AFP表达水平 | 第75
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| · rhOSM诱导SMMC-7721 细胞分化相关生化指标的检测 | 第75-76
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| · 结果处理及统计学分析 | 第76-77
页 |
| · 结果 | 第77-90
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| · SMMC-7721 细胞中OSMR及OSM表达的鉴定 | 第77
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| · rhOSM对SMMC-7721 细胞生长作用的影响 | 第77-80
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| · rhOSM对SMMC-7721 细胞周期及凋亡率的影响 | 第80-82
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| · 免疫荧光细胞化学法检测STAT3 磷酸化 | 第82
页 |
| · rhOSM对SMMC-7721 细胞形态与超微结构的影响 | 第82-85
页 |
| · rhOSM对SMMC-7721 细胞AFP表达水平的影响 | 第85-87
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| · rhOSM诱导SMMC-7721 细胞分化相关生化指标的影响 | 第87-90
页 |
| · 讨论 | 第90-95
页 |
| 第5章 rhOSM体内诱导肝癌细胞分化的实验研究 | 第95-108
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| · 材料与方法 | 第95-98
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| · 器材及设备材料 | 第95
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| · 主要试剂 | 第95
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| · 细胞株 | 第95-96
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| · 实验动物 | 第96
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| · 试剂配制 | 第96
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| · 接种细胞的制备 | 第96
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| · 小鼠肝癌模型的建立、动物分组及给药 | 第96
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| · 肿瘤生长情况测定及抑瘤率的计算 | 第96-97
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| · 荷瘤鼠外周血AFP水平检测 | 第97
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| · 荷瘤小鼠胸腺指数、脾指数、肝脏指数的测定 | 第97
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| · 肿瘤组织光镜观察 | 第97
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| · 结果处理及统计学分析 | 第97-98
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| · 结果 | 第98-105
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| · rhOSM在体内对小鼠肝癌细胞H22 皮下移植瘤生长的影响 | 第98-99
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| · rhOSM对荷瘤鼠外周血AFP的影响 | 第99-101
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| · rhOSM对荷瘤鼠胸腺指数、脾指数及肝脏指数的影响 | 第101-103
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| · rhOSM对小鼠肝癌细胞H22 皮下移植瘤组织形态学影响 | 第103-105
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| · 讨论 | 第105-108
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| 研究总结与创新点 | 第108-109
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| 参考文献 | 第109-117
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| 附录 rhOSM N-端 15 个氨基酸残基序列色谱图 | 第117-119
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| 攻读博士期间发表的学术论文及获奖情况 | 第119-120
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| 致谢 | 第120-121
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| 中文摘要 | 第121-125
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| Abstract | 第125-129
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