论文目录 | |
| 英汉缩略语名词对照 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-15页 |
| 英文摘要 | 第15-21页 |
| 前言 | 第21-28页 |
| 参考文献 | 第24-28页 |
| 第一部分 SIRT1对HBV转录和复制的影响 | 第28-70页 |
| 1 材料与方法 | 第28-50页 |
| · 材料 | 第28-34页 |
| · 主要细胞 | 第28-29页 |
| · 质粒和抗体 | 第29页 |
| · 试剂 | 第29-31页 |
| · 仪器设备 | 第31-32页 |
| · 试剂配制 | 第32-34页 |
| · 方法 | 第34-50页 |
| · 质粒提取 | 第34-35页 |
| · 细胞培养 | 第35-37页 |
| · Real time Quantitative PCR(qRT-PCR) 检测HBV对SIRT1mRNA表达的影响 | 第37-39页 |
| · Western blot检测HBV复制对SIRT1蛋白表达水平的影响，检测SIRT1的沉默水平和过表达水平并检测SIRT1沉默对HBc表达的影响 | 第39-42页 |
| · Real-time PCR分析SIRT1沉默和过表达对HBV复制的影响 | 第42-44页 |
| · Southern blot分析SIRT1沉默和过表达对HBV复制的影响 | 第44-45页 |
| · SIRT1 沉默对环化 HBV 复制的影响 | 第45-49页 |
| · ELISA分析SIRT1沉默和过表达对HBV表面抗原(HBsAg)分泌的影响 | 第49页 |
| · ELISA分析SIRT1沉默和过表达对HBV表面抗原(HBsAg)分泌的影响 | 第49-50页 |
| 2 结果 | 第50-64页 |
| · HBV复制对SIRTI表达的影响 | 第50-54页 |
| · HBV复制对SIRT1 mRNA表达水平的影响 | 第50-52页 |
| · HBV复制对SIRT1蛋白水平表达的影响 | 第52-53页 |
| · HepAD38细胞中验证HBV复制对SIRT1表达的影响 | 第53-54页 |
| · SIRT1沉默对HBV复制和转录的影响 | 第54-60页 |
| · SIRT1沉默水平验证 | 第54-55页 |
| · SIRT1沉默对HBV稳定复制的细胞中HBV复制中间体表达的影响 | 第55-56页 |
| · SIRT1沉默对HBV稳定复制的细胞中HBV转录的影响 | 第56-57页 |
| · SIRT1沉默对HBV蛋白表达的影响 | 第57-58页 |
| · SIRT1沉默对瞬时表达HBV复制的影响 | 第58-60页 |
| · 过表达SIRT1对HBV复制和转录的影响 | 第60-64页 |
| · SIRT1过表达水平验证 | 第60-61页 |
| · SIRT1过表达对HBV复制中间体表达的影响 | 第61-62页 |
| · SIRT1过表达对HBV转录的影响 | 第62-63页 |
| · SIRT1过表达对HBV蛋白表达的影响 | 第63-64页 |
| 3 讨论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 第二部分 SIRT1调控HBV转录和复制的分子机制研究 | 第70-93页 |
| 1 材料与方法 | 第71-80页 |
| · 材料 | 第71-74页 |
| · 主要细胞 | 第71页 |
| · 质粒和抗体 | 第71页 |
| · 试剂 | 第71-73页 |
| · 仪器设备 | 第73-74页 |
| · 引物序列 | 第74页 |
| · 方法 | 第74-80页 |
| · 双荧光素酶报告系统检测SIRT1对HBV启动子活性的影响 | 第74-75页 |
| · QRT-PCR分析SIRT1沉默对与HBV转录有关的转录因子表达的影响 | 第75页 |
| · Western blot检测SIRT1对c-Jun蛋白表达的影响 | 第75-76页 |
| · 染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation, CHIP)分析c-Jun与HBV core promoter的结合 | 第76-78页 |
| · pGEM-HBV1.3 中HBV core promoter与c-Jun结合位点突变 | 第78-80页 |
| · Real-time PCR和southern blot检测SIRT1对突变型pGEM-HBV1.3 复制的影响及分析c-Jun沉默在SIRT1促进HBV复制中的作用 | 第80页 |
| 2 结果 | 第80-89页 |
| · SIRT1对HBV启动子活性的影响 | 第80-82页 |
| · SIRT1对与HBV转录相关的转录因子表达的影响 | 第82-83页 |
| · 转录因子AP-1 与HBV core promoter相互结合 | 第83-84页 |
| · AP-1 结合位点突变减弱SIRT1对HBV复制的促进作用 | 第84-85页 |
| · AP-1 在SIRT1促进HBV复制中的作用 | 第85-89页 |
| 3 讨论 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-93页 |
| 第三部分 SIRT1抑制剂尼克酰胺对HBV复制的影响 | 第93-117页 |
| 1 材料与方法 | 第93-101页 |
| · 材料 | 第93-96页 |
| · 主要细胞和动物 | 第93页 |
| · 质粒和抗体 | 第93页 |
| · 试剂 | 第93-95页 |
| · 仪器设备 | 第95-96页 |
| · 方法 | 第96-101页 |
| · MTS实验分析nicotinamide在HepAD38和HepG2.2.15细胞中的半数细胞毒性浓度(CC50) | 第96页 |
| · HepAD38和HepG2.2.15细胞中检测nicotinamide对HBV复制的影响 | 第96-97页 |
| · 小鼠血清中HBV DNA提取 | 第97-98页 |
| · 肝组织中基因组DNA的提取 | 第98-99页 |
| · HBV转基因小鼠(HBV-Tg C57BL/6)中验证nicotinamide对HBV复制的影响 | 第99页 |
| · 检测nicotinamide处理后HBV转基因小鼠血清中AST(谷草转氨酶)/ALT(谷丙转氨酶)的水平 | 第99-101页 |
| 2 结果 | 第101-112页 |
| · 体外验证SIRT1抑制剂nicotinamide对HBV复制的影响 | 第101-107页 |
| · MTS实验分析nicotinamide在HepAD38和HepG2.2.15细胞中的半数细胞毒性浓度(CC50) | 第101-102页 |
| · Nicotinamide对HepAD38和HepG2.2.15细胞中HBV复制的影响 | 第102-104页 |
| · Nicotinamide对HepAD38和HepG2.2.15细胞中HBV 3.5kbmRNA表达水平的影响 | 第104-105页 |
| · Nicotinamide对HepAD38和HepG2.2.15细胞中HBV蛋白表达的影响 | 第105-107页 |
| · HBV转基因小鼠(HBV-Tg C57BL/6)体内验证nicotinamide对HBV复制的影响 | 第107-112页 |
| 3 讨论 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-117页 |
| 文献综述 | 第117-135页 |
| 参考文献 | 第124-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文目录 | 第136-138页 |
