论文目录 | |
| 缩略词表 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 前言 | 第9-18页 |
| 一.非受体酪氨酸激酶c-Abl的结构与功能 | 第9-13页 |
| ·c-Abl的结构特点 | 第9-10页 |
| · c-Abl的N端 | 第9-10页 |
| · c-Abl的C端 | 第10页 |
| ·c-Abl激酶活性的调控 | 第10-11页 |
| ·c-Abl的亚细胞定位与其功能的关系 | 第11-13页 |
| · c-Abl在细胞核中的作用 | 第11-12页 |
| · c-Abl在细胞质中的作用 | 第12-13页 |
| · c-Abl的细胞核-细胞质穿梭过程 | 第13页 |
| 二.大分子物质的跨核膜转运的途径及其调控 | 第13-15页 |
| 三.筛选相互作用蛋白的重要工具——酵母双杂交系统 | 第15-18页 |
| 材料与方法 | 第18-31页 |
| ·酵母双杂交用菌株、质粒、培养基及其他试剂 | 第18页 |
| ·酵母双杂交方法 | 第18-22页 |
| · 酵母感受态细胞的制备 | 第18-19页 |
| · 小规模酵母转化 | 第19页 |
| · β-gal分析 | 第19-20页 |
| · 酵母(BD质粒)感受态的制备 | 第20页 |
| · 大规模转化文库质粒DNA | 第20-21页 |
| · 阳性克隆的筛选及酵母质粒的提取 | 第21页 |
| · AD质粒的PCR鉴定、测序及转化 | 第21-22页 |
| · 阳性AD质粒的再次验证 | 第22页 |
| ·其它实验用菌株、细胞株及质粒 | 第22页 |
| ·分子生物学工具酶 | 第22页 |
| ·载体构建、引物合成及测序 | 第22-25页 |
| · Flag-p62及其突变体的构建 | 第23页 |
| · Myc-p62及其突变体的构建 | 第23-25页 |
| · GST-p62及其突变体的构建 | 第25页 |
| · DsRed-p62表达载体的构建 | 第25页 |
| ·谷胱甘肽S转移酶(glutathion S-transferase，GST)融合蛋白的制备 | 第25-26页 |
| ·转染质粒的制备 | 第26页 |
| ·细胞培养与转染 | 第26-27页 |
| ·免疫沉淀(Immunoprecipitation，IP)与免疫印迹(Immunoblot，IB) | 第27-29页 |
| ·体外激酶分析实验 | 第29页 |
| ·细胞核、细胞质蛋白的分离 | 第29-30页 |
| ·活体细胞的荧光共聚焦显微镜观察 | 第30-31页 |
| 结果 | 第31-40页 |
| ·通过酵母双杂交实验获得与c-Abl相互作用的蛋白：核孔蛋白p62 | 第31-32页 |
| ·p62在体内外均与c-Abl相互作用 | 第32-35页 |
| ·p62可被c-Abl磷酸化 | 第35-37页 |
| ·p62可促进c-Abl进入细胞核 | 第37-38页 |
| ·DNA损伤处理后p62与c-Abl之间相互作用的变化 | 第38-40页 |
| 讨论 | 第40-47页 |
| ·通过酵母双杂交实验获得可能参与c-Abl核-质穿梭过程的相互作用蛋白：核孔蛋白p62 | 第40-41页 |
| ·非受体酪氨酸激酶c-Abl与核孔蛋白p62之间的相互作用 | 第41-42页 |
| ·c-Abl对p62的磷酸化作用 | 第42-43页 |
| ·p62对c-Abl进入细胞核的影响 | 第43-45页 |
| ·DNA损伤对c-Abl和p62相互作用的影响 | 第45-46页 |
| ·小结 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 附录 | 第51-53页 |
| 致谢 | 第53-56页 |
| 文献综述 | 第56-65页 |
| 已接受论文 | 第65-80页 |
| 博士期间已发表论文目录 | 第80页 |
