论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-9
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| 英文摘要 | 第9-12
页 |
| 前言 | 第12-19
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| 第一部分 95C和95D细胞cDNA文库的构建、扩增及鉴定以及与uPA增强子dCOM区结合的蛋白质的筛选 | 第19-49
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| 引言 | 第19-21
页 |
| 材料与方法 | 第21-33
页 |
| 实验结果 | 第33-43
页 |
| uPA增强子的dCOM区与95D和95C细胞核蛋白的EMSA | 第33-35
页 |
| cDNA文库的构建和鉴定 | 第35
页 |
| 酵母单杂交诱饵质粒的构建 | 第35-38
页 |
| 酵母单杂交筛选95D和95C细胞的cDNA文库 | 第38-39
页 |
| 阳性克隆的鉴定及其同源性比较 | 第39-43
页 |
| 讨论 | 第43-47
页 |
| 小结 | 第47-49
页 |
| 第二部分 PBK1蛋白的原核表达、纯化及与uPA增强子dCOM区的体外相互作用 | 第49-62
页 |
| 引言 | 第49-50
页 |
| 材料与方法 | 第50-52
页 |
| 实验结果 | 第52-58
页 |
| 重组6xHis与PBK1融合蛋白表达质粒的构建和鉴定 | 第52-54
页 |
| 6xHis-PBK1融合蛋白的原核诱导表达和纯化 | 第54-55
页 |
| 6xHis.PBK1融合蛋白的纯化 | 第55-57
页 |
| PBK1蛋白可在体外环境下与uPA启动子的dCOM区结合 | 第57-58
页 |
| 讨论 | 第58-60
页 |
| 小结 | 第60-62
页 |
| 第三部分 PBK1蛋白在各组织器官表达谱和在细胞内的定位以及对uPA启动子活性影响的研究 | 第62-80
页 |
| 引言 | 第62-63
页 |
| 材料与方法 | 第63-68
页 |
| 实验结果 | 第68-74
页 |
| Real-time检测PBK1基因在正常各组织和95C和95D细胞中的表达谱 | 第68-69
页 |
| PBK1的真核表达质粒的构建 | 第69
页 |
| pEGFP-C3-PBK1质粒的瞬时转染和细胞内定位 | 第69-70
页 |
| PBK1的核定位序列和L1同源结构域缺失体的构建以及其细胞内定位 | 第70-71
页 |
| uPA启动子系列缺失突变体的构建 | 第71-72
页 |
| uPA启动子缺失突变体转染和荧光素酶活性测定 | 第72-73
页 |
| Western blot和ELISA分析PBK1过表达对uPA蛋白水平的影响 | 第73-74
页 |
| 讨论 | 第74-79
页 |
| 小结 | 第79-80
页 |
| 总结与展望 | 第80-81
页 |
| 综述 | 第81-92
页 |
| 附录 | 第92-93
页 |
| 致谢 | 第93-94
页 |
| 论文独创性声明 | 第94
页 |
| 论文使用授权声明 | 第94
页 |
