论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-9
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| 英文摘要 | 第9-11
页 |
| 研究背景(第一部分) | 第11-17
页 |
| 一、引言 | 第11-12
页 |
| 二、Kv4钾离子通道的研究概况 | 第12-15
页 |
| 三、木课题的研究意义 | 第15-17
页 |
| 蛋白的表达与纯化(第一部分) | 第17-42
页 |
| 一、引言 | 第17-19
页 |
| ·表达片段的设计思路: | 第17-18
页 |
| ·表达标签的选择与组合 | 第18
页 |
| ·表达及纯化实验流程示意图(图1-2-1): | 第18-19
页 |
| 二、实验材料及仪器 | 第19-20
页 |
| ·菌株和载体: | 第19
页 |
| ·试剂和工具酶: | 第19
页 |
| ·仪器与服务: | 第19-20
页 |
| 三、试验方法及流程 | 第20-27
页 |
| ·基因的亚克隆 | 第20-23
页 |
| ·蛋白的表达与纯化 | 第23-27
页 |
| 四、实验结果及分析 | 第27-42
页 |
| ·Kv·-KChIP1复合体体外共转化的重组筛选: | 第28
页 |
| ·各种组合的表达和亲和纯化结果:(图1-2-3～图1-2-9) | 第28-33
页 |
| ·L表达体系下复合体的大量纯化(图1-2-10～图1-2-25) | 第33-42
页 |
| 晶体的生长与结构的解析(第一部分) | 第42-72
页 |
| 一、Kv·N-KChIP1蛋白复合物的晶体生长 | 第42-47
页 |
| ·蛋白质晶体的概念与性质 | 第42
页 |
| ·蛋白质结晶的原理 | 第42-43
页 |
| ·蛋白质晶体的培养及优化 | 第43-46
页 |
| ·复合物晶体的衍射初试及晶体优化 | 第46-47
页 |
| 二、Kv·N-KChIP1蛋白复合物结构测定与描述 | 第47-64
页 |
| (一) 晶体衍射的原理 | 第47-51
页 |
| (二) 晶体衍射及结构解析中的方法和应用 | 第51-58
页 |
| (三) 结构模型的建立和修正 | 第58-60
页 |
| (四) 实验过程 | 第60-64
页 |
| 三、结构描述 | 第64-72
页 |
| ·复合物的整体结构 | 第64-68
页 |
| ·Kv·N分子与KChIP1分子结合区域的结构 | 第68-72
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| 复合物的结构与功能(第一部分) | 第72-82
页 |
| 一、引言 | 第72
页 |
| 二、实验思路 | 第72-73
页 |
| ·突变的设计思路 | 第72
页 |
| ·对Kv·的KBD结构域与KChIP1结合区的突变 | 第72-73
页 |
| ·对Kv·的T1结构域与KChIP1结合区的突变 | 第73
页 |
| 三、实验方法与原理 | 第73-76
页 |
| ·定点突变法 | 第73-75
页 |
| ·检测蛋白间相互作用 | 第75-76
页 |
| 四、实验结果与分析 | 第76-81
页 |
| ·对Kv·的KBD结构域的突变 | 第76-77
页 |
| ·对KChIP1疏水沟的突变 | 第77-78
页 |
| ·KChIP1稳定了Kv4.3N的四聚体结构 | 第78-79
页 |
| ·电生理学角度验证KChIP1与Kv·3结合位点的功能 | 第79-81
页 |
| 五、总结 | 第81-82
页 |
| 参考文献(第一部分) | 第82-85
页 |
| 研究背景(第二部分) | 第85-89
页 |
| 一、宿主的免疫应答与病原微生物的逃逸 | 第85-86
页 |
| 二、宿主免疫信号的主要分子通路 | 第86-87
页 |
| 三、病原体对免疫信号的干扰与苏氨酸磷酸裂解酶的发现 | 第87-88
页 |
| 四、本课题的研究意义 | 第88-89
页 |
| 蛋白的表达纯化与晶体的生长(第二部分) | 第89-102
页 |
| 一、引言 | 第89-91
页 |
| ·底物的选择与共结晶策略 | 第89-90
页 |
| ·表达策略与表达标签的选择 | 第90-91
页 |
| 二、基因的亚克隆与蛋白的表达纯化和分析 | 第91-100
页 |
| ·基因的亚克隆 | 第91-92
页 |
| ·蛋白的表达纯化 | 第92-100
页 |
| 三、蛋白的结晶 | 第100-102
页 |
| 结构的解析与分析(第二部分) | 第102-112
页 |
| 一、数据的收集与结构的解析 | 第102-105
页 |
| ·数据的收集处理 | 第102-103
页 |
| ·相位的确定和模型的构建和修正 | 第103-105
页 |
| ·结构模型参数 | 第105
页 |
| 二、结构描述与分析 | 第105-112
页 |
| ·Spvc与底物肽段的整体结构 | 第105-108
页 |
| ·Spvc对底物肽段的识别特异性 | 第108-110
页 |
| ·Spvc在结合底物时活性中心的构象变化 | 第110-112
页 |
| 磷酸苏氨酸裂解酶的酶活机制的研究(第二部分) | 第112-122
页 |
| 一、引言 | 第112-114
页 |
| 二、实验方法 | 第114
页 |
| ·蛋白的定点突变 | 第114
页 |
| ·SpvC酶活分析 | 第114
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| 三、实验结果及分析 | 第114-121
页 |
| ·活性中心的结构与机制分析 | 第114-119
页 |
| ·突变及生化分析 | 第119-121
页 |
| 四、总结 | 第121-122
页 |
| 参考文献(第二部分) | 第122-124
页 |
| 附录(文章发表情况) | 第124-125
页 |
| 致谢 | 第125页 |
