论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5
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| Abstract | 第5-13
页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-51
页 |
| · Mg~(2+)的生物化学概述 | 第15-20
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| · Mg~(2+)的化学性质 | 第16-17
页 |
| · Mg~(2+)转运研究中的Mg~(2+)测量技术 | 第17-20
页 |
| · 原子吸收分光光度法 | 第18
页 |
| · Mg~(2+)同位素的应用 | 第18-19
页 |
| · 荧光探针的应用 | 第19
页 |
| · 其他测定技术 | 第19-20
页 |
| · 原核生物Mg~(2+)转运系统 | 第20-44
页 |
| · MgtA/B Mg~(2+)转运系统 | 第22-26
页 |
| · MgtA/B 的转录调控与生理作用 | 第22-24
页 |
| · MgtA/B 的结构与功能 | 第24-26
页 |
| · MgtE Mg~(2+)转运系统 | 第26-27
页 |
| · CorA Mg~(2+)转运系统 | 第27-44
页 |
| · CorA 物种分布和分类 | 第27-32
页 |
| · CorA 的生理功能 | 第32-34
页 |
| · CorA 的拓朴结构 | 第34-37
页 |
| · 海栖热孢菌CorA 的晶体结构概述 | 第37-38
页 |
| · 海栖热孢菌CorA 的别构调节位点 | 第38-39
页 |
| · 海栖热孢菌CorA 晶体结构表面的电荷分布 | 第39-40
页 |
| · 海栖热孢菌CorA 的Mg~(2+)转运通道 | 第40-42
页 |
| · 海栖热孢菌CorA 转运过程中的“开/关”循环模型 | 第42-44
页 |
| · 其他Mg~(2+)转运系统简介 | 第44-49
页 |
| · 阳离子通道类 | 第45-47
页 |
| · Na/K 交换体类 | 第47-49
页 |
| · 本研究的意义 | 第49-51
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| 第2章 大肠杆菌CORA 拓朴结构的研究 | 第51-65
页 |
| · 材料与方法 | 第52-56
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| · 菌株与质粒 | 第52-53
页 |
| · 培养基与试剂 | 第53-54
页 |
| · 酵母突变体互补测试 | 第54
页 |
| · 细菌原生质体制备 | 第54-55
页 |
| · 抗体标记及免疫测定 | 第55-56
页 |
| · 结果与分析 | 第56-63
页 |
| · EcCorA 转运活性的酵母突变体互补测定 | 第56-58
页 |
| · 添加N-、C-端融合标签EcCorA 蛋白转运活性的互补检测 | 第58-59
页 |
| · 重组CorA 蛋白N-、C-端6×组氨酸标签的位置检测 | 第59-60
页 |
| · 带有N-和C-末端6×组氨酸标签的Tm CorA 转运活性的互补测定 | 第60-61
页 |
| · TmCorA N-、C-末端位置测定 | 第61-63
页 |
| · 讨论 | 第63-65
页 |
| 第3章 大肠杆菌CORA 间质结构域结构与功能的研究 | 第65-89
页 |
| · 材料与方法 | 第66-72
页 |
| · 菌株与培养基 | 第66
页 |
| · PPD、C191A、PPDH 表达质粒构建 | 第66-67
页 |
| · EcCorA-PPD 相关蛋白的表达与纯化 | 第67-69
页 |
| · EcCorA 蛋白的表达与纯化 | 第69-70
页 |
| · GST-EcCorA-PPD、EcCorA-PPD 的电镜观察及图像处理 | 第70-71
页 |
| · 园二色光谱测定 | 第71
页 |
| · 荧光光谱法测定底物结合/解离常数 | 第71-72
页 |
| · 结果与分析 | 第72-86
页 |
| · EcCorA-PPD 相关蛋白表达条件的优化 | 第72-73
页 |
| · EcCorA-PPD 相关蛋白的提取与亲合纯化 | 第73-78
页 |
| · GST-EcCorA-PPD 在磷脂单层膜上的二维晶体结构 | 第78-80
页 |
| · EcCorA-PPD 在水溶液中的结构 | 第80-82
页 |
| · EcCorA-PPD 和EcCorA 具有相似的二级结构 | 第82-84
页 |
| · EcCorA-PPD 和EcCorA 具有相似的底物结合能力 | 第84-86
页 |
| · 讨论 | 第86-89
页 |
| 第4章 大肠杆菌CORA 间质结构域区转运相关氨基酸残基的点突变分析 | 第89-104
页 |
| · 材料与方法 | 第90-94
页 |
| · 菌株与质粒 | 第90-92
页 |
| · 试剂与培养基 | 第92-93
页 |
| · 酵母的遗传转化 | 第93
页 |
| · 酵母转化子EcCorA 表达水平的检测 | 第93-94
页 |
| · Mg~(2+)缺陷生长表型鉴定 | 第94
页 |
| · 结果与分析 | 第94-100
页 |
| · EcCorA 的删除突变分析 | 第94-96
页 |
| · EcCorA 的点突变体蛋白在酵母的表达水平检测 | 第96-98
页 |
| · EcCorA 的点突变分析 | 第98-100
页 |
| · 讨论 | 第100-104
页 |
| 第5章 大肠杆菌CORA 脂质体功能重组及转运动力学特性的初步研究 | 第104-119
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| · 材料与方法 | 第105-108
页 |
| · EcCorA 蛋白的提取与纯化 | 第105-106
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| · E. coli 总膜脂脂质体的制备 | 第106
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| · EcCorA 的功能重组 | 第106-107
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| · EcCorA 转运活性的测定 | 第107
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| · 数据处理 | 第107-108
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| · 结果与分析 | 第108-118
页 |
| · EcCorA 的重组 | 第108-109
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| · EcCorA 重组脂质体形态及完整性的检测 | 第109-110
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| · EcCorA 蛋白插入方向的检测 | 第110-111
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| · 蛋白脂质体跨膜电势梯度的建立 | 第111-112
页 |
| · Calcein 荧光探针的标定 | 第112-113
页 |
| · EcCorA 转运活性的测定 | 第113-114
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| · EcCorA 转运体转运参数的测定 | 第114-116
页 |
| · EcCorA 转运体驱动力来源的初步测定 | 第116-118
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| · 讨论 | 第118-119
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| 第6章 论文总结 | 第119-123
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| · 论文总结 | 第119-121
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| · 工作中待解决的问题 | 第121-123
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| 参考文献 | 第123-137
页 |
| 致谢 | 第137-138
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| 个人简历、在学期间的研究成果及发表的论文 | 第138页 |
