论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第14-30页 |
| 1.1 癌症概述 | 第14-18页 |
| 1.1.1 癌症的概念 | 第14页 |
| 1.1.2 癌症的症状 | 第14-15页 |
| 1.1.3 癌症的生物学特征 | 第15-17页 |
| 1.1.4 癌症的诱因 | 第17-18页 |
| 1.1.5 癌症的治疗 | 第18页 |
| 1.2 乳腺癌概述 | 第18-20页 |
| 1.2.1 乳腺癌的特征 | 第18页 |
| 1.2.2 导致乳腺癌的风险因素 | 第18-19页 |
| 1.2.3 乳腺癌的诊断 | 第19页 |
| 1.2.4 乳腺癌的分型 | 第19-20页 |
| 1.2.5 乳腺癌的预防 | 第20页 |
| 1.2.6 乳腺癌的治疗 | 第20页 |
| 1.3 乳腺癌他莫昔芬抗性概述 | 第20-25页 |
| 1.3.1 他莫昔芬简介 | 第20-21页 |
| 1.3.2 雌激素受体的作用机制 | 第21-23页 |
| 1.3.4 他莫昔芬抗性的分子机制 | 第23-25页 |
| 1.4 microRNA概述 | 第25-29页 |
| 1.4.1 microRNA的生成 | 第25-26页 |
| 1.4.2 RNA诱导的沉默复合体(RNA induced silencing complex) | 第26-27页 |
| 1.4.3 microRNA的细胞功能 | 第27-28页 |
| 1.4.4 microRNA的检测与操控(detection and manipulation) | 第28页 |
| 1.4.5 microRNA导致的疾病 | 第28-29页 |
| 1.5 本章小结 | 第29-30页 |
| 第二章 miR-1254及CCAR1在乳腺癌中表达下调 | 第30-40页 |
| 2.1 人10号染色体长臂miRNA基因不稳定性筛查 | 第30-32页 |
| 2.2 miR-1254与CCAR1共享启动子 | 第32-34页 |
| 2.3 miR—1254与CCAR1在乳腺癌临床样本中表达下调 | 第34-37页 |
| 2.4 miR-1254与CCAR1在乳腺癌细胞中表达下调 | 第37-39页 |
| 2.5 本章小结 | 第39-40页 |
| 第三章 miR-1254与CCAR1在转录后水平相互稳定 | 第40-56页 |
| 3.1 miR-1254 sponge的构建 | 第40-41页 |
| 3.2 miR-1254在转录后水平稳定CCARl | 第41-44页 |
| 3.3 miR-1254通过与CCAR1 5’UTR结合而稳定CCAR1 | 第44-52页 |
| 3.4 CCARl 5'UTR在转录后水平稳定miR-1254 | 第52-54页 |
| 3.5 本章小结 | 第54-56页 |
| 第四章 miR-1254与CCAR1相互稳定的分子基础 | 第56-64页 |
| 4.1 miR-1254与CCAR1的相互稳定依赖于AG02 | 第56-60页 |
| 4.2 miR-1254与CCAR1的相互稳定依赖于局部二级结构 | 第60-62页 |
| 4.3 miR-1254对CCAR1的稳定依赖于局部二级结构 | 第62-63页 |
| 4.4 本章小结 | 第63-64页 |
| 第五章 miR-1254抑制乳腺癌细胞增殖 | 第64-70页 |
| 5.1 miR-1254抑制乳腺癌细胞增殖 | 第64-67页 |
| 5.2 miR-1254抑制乳腺癌细胞分裂 | 第67-68页 |
| 5.3 miR-1254促进乳腺癌细胞凋亡 | 第68-69页 |
| 5.4 本章小结 | 第69-70页 |
| 第六章 miR-1254抑制乳腺癌转移和干细胞样行为 | 第70-78页 |
| 6.1 miR-1254抑制乳腺癌细胞转移 | 第70-73页 |
| 6.2 miR-1254抑制乳腺癌细胞干细胞样行为 | 第73-77页 |
| 6.3 本章小结 | 第77-78页 |
| 第七章 miR-1254恢复乳腺癌他莫昔芬敏感性 | 第78-92页 |
| 7.1 抑制miR-1254可以降低ER+乳腺癌细胞雌激素依赖性 | 第78-81页 |
| 7.2 抑制miR-1254使ER+细胞产生他莫昔芬抗药性 | 第81-86页 |
| 7.3 过表达miR-1254可以恢复他莫昔芬敏感性 | 第86-90页 |
| 7.4 本章小结 | 第90-92页 |
| 第八章 CCAR1 5’UTR恢复乳腺癌他莫昔芬敏感性 | 第92-96页 |
| 8.1 CCAR1 5’UTR恢复他莫昔芬敏感性 | 第92-95页 |
| 8.2 本章小结 | 第95-96页 |
| 第九章 miR-1254通过3’UTR直接调控的基因 | 第96-102页 |
| 9.1 生物信息学预测miR-1254靶点 | 第96页 |
| 9.2 双荧光素酶报告实验验证靶点 | 第96-98页 |
| 9.3 免疫印迹实验验证靶点 | 第98-99页 |
| 9.4 免疫组织化学实验验证靶点 | 第99-100页 |
| 9.5 本章小结 | 第100-102页 |
| 第十章 CCAR1与miR-1254靶基因的相互作用 | 第102-108页 |
| 10.1 CCAR1 5’UTR可以下调miR-1254的靶基因 | 第102-105页 |
| 10.2 miR-1254靶基因下调CCARl | 第105-106页 |
| 10.3 本章小结 | 第106-108页 |
| 第十一章 总结与讨论 | 第108-110页 |
| 第十二章 材料与方法 | 第110-144页 |
| 12.1 乳腺癌临床冷冻组织中抽提miRNA | 第110-111页 |
| 12.1.1 乳腺癌病人临床冷冻组织样本 | 第110页 |
| 12.1.2 实验试剂及仪器 | 第110页 |
| 12.1.3 冷冻组织样本中miRNA的抽提 | 第110-111页 |
| 12.2 miRNA的反转录 | 第111页 |
| 12.2.1 实验试剂及仪器 | 第111页 |
| 12.2.2 RT-PCR实验步骤 | 第111页 |
| 12.3 miRNA 的quantitive Real-time PCR(qRT-PCR) | 第111-112页 |
| 12.3.1 实验试剂及仪器 | 第111页 |
| 12.3.2 qRT-PCR实验步骤 | 第111-112页 |
| 12.4 细胞内总RNA提取 | 第112-113页 |
| 12.4.1 实验试剂及仪器 | 第112页 |
| 12.4.2 TRIZOL法提取RNA实验步骤 | 第112-113页 |
| 12.4.3 Ambion公司的miRNA抽提试剂盒抽取总RNA实验步骤 | 第113页 |
| 12.5 总RNA的反转录 | 第113-114页 |
| 12.5.1 实验试剂及仪器 | 第113-114页 |
| 12.5.2 RT-PCR实验步骤 | 第114页 |
| 12.6 总RNA的quantitive Real-time PCR(qRT-PCR) | 第114-115页 |
| 12.6.1 实验试剂及仪器 | 第114页 |
| 12.6.2 qRT-PCR实验步骤 | 第114-115页 |
| 12.7 双荧光报告实验 | 第115-119页 |
| 12.7.1 实验试剂及仪器 | 第115页 |
| 12.7.2 双荧光报告实验的原理 | 第115页 |
| 12.7.3 双荧光素酶报告载体的构建 | 第115-119页 |
| 12.8 载体的定点突变 | 第119-120页 |
| 12.8.1 实验试剂及仪器 | 第119页 |
| 12.8.2 实验步骤 | 第119-120页 |
| 12.9 shRNA载体构建 | 第120-121页 |
| 12.10 其它载体的构建 | 第121-122页 |
| 12.11 质粒中抽 | 第122-123页 |
| 12.12 细胞培养 | 第123-124页 |
| 12.12.1 实验试剂及仪器 | 第123页 |
| 12.12.2 细胞日常培养 | 第123页 |
| 12.12.3 细胞的冻存与复苏 | 第123-124页 |
| 12.12.4 他莫昔芬抗性细胞系的构建 | 第124页 |
| 12.13 细胞的种板和转染 | 第124-125页 |
| 12.13.1 实验试剂及仪器 | 第124页 |
| 12.13.2 细胞的种板 | 第124-125页 |
| 12.13.3 细胞的转染步骤 | 第125页 |
| 12.14 MTT(细胞活力测定法) | 第125-126页 |
| 12.14.1 实验原理 | 第125页 |
| 12.14.2 实验试剂及仪器 | 第125页 |
| 12.14.3 实验步骤 | 第125-126页 |
| 12.15 软琼脂克隆形成实验(Soft Agar) | 第126-127页 |
| 12.15.1 实验试剂及仪器 | 第126页 |
| 12.15.2 实验步骤 | 第126-127页 |
| 12.16 细胞二维(2D)基质胶(matrigel)培养 | 第127-128页 |
| 12.16.1 实验原理 | 第127-128页 |
| 12.16.2 实验试剂及仪器 | 第128页 |
| 12.16.3 实验步骤 | 第128页 |
| 12.17 细胞克隆形成实验 | 第128-129页 |
| 12.17.1 实验原理 | 第128页 |
| 12.17.2 实验试剂及仪器 | 第128页 |
| 12.17.3 实验步骤 | 第128-129页 |
| 12.18 细胞单层培养克隆形成实验(monolayer culture) | 第129-130页 |
| 12.18.1 实验原理 | 第129页 |
| 12.18.2 实验试剂及仪器 | 第129页 |
| 12.18.3 实验步骤 | 第129-130页 |
| 12.19 细胞球囊悬浮培养(mammospheric growth) | 第130页 |
| 12.19.1 实验原理 | 第130页 |
| 12.19.2 实验试剂及仪器 | 第130页 |
| 12.19.3 实验步骤 | 第130页 |
| 12.20 细胞迁移(Transwell Assay-Migration)实验 | 第130-131页 |
| 12.20.1 实验原理 | 第130-131页 |
| 12.20.2 实验试剂及仪器 | 第131页 |
| 12.20.3 实验步骤 | 第131页 |
| 12.21 流式细胞术(Flow Cytometry,FCM) | 第131-133页 |
| 12.21.1 实验原理 | 第131-132页 |
| 12.21.2 实验试剂及仪器 | 第132页 |
| 12.21.3 实验步骤 | 第132-133页 |
| 12.22 蛋白印记法(western blot) | 第133-137页 |
| 12.22.1 实验试剂及仪器 | 第133-134页 |
| 12.22.2 实验步骤 | 第134-137页 |
| 12.23 稳转细胞系的构建 | 第137-138页 |
| 12.23.1 实验试剂及仪器 | 第137页 |
| 12.23.2 实验步骤 | 第137-138页 |
| 12.24 裸鼠体内荷瘤实验 | 第138-139页 |
| 12.24.1 实验试剂及仪器 | 第138页 |
| 12.24.2 实验步骤 | 第138-139页 |
| 12.25 免疫组织化学工HC | 第139-141页 |
| 12.25.1 实验试剂及仪器 | 第139页 |
| 12.25.2 实验步骤 | 第139-141页 |
| 12.26 苏木精—伊红染色法(HE染色) | 第141页 |
| 12.27 脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL) | 第141-142页 |
| 12.27.1 实验试剂及仪器 | 第141页 |
| 12.27.2 实验步骤 | 第141-142页 |
| 12.28 生物信息学的统计分析 | 第142-143页 |
| 12.29 亲和纯化与miR-1254相结合的mRNA | 第143页 |
| 12.30 亲和纯化与C5U结合的miRNA | 第143-144页 |
| 附表：反转录,QPCR及克隆引物序列 | 第144-150页 |
| 参考文献 | 第150-162页 |
| 致谢 | 第162-164页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第164页 |
