论文目录 | |
| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-34页 |
| 第一节 重要经济虾蟹类动物的养殖现状及主要疫病 | 第12-16页 |
| 一、凡纳滨对虾和中华绒螯蟹的养殖现状 | 第12-13页 |
| 二、虾蟹养殖业病害频繁爆发 | 第13-16页 |
| 第二节 甲壳动物的免疫防御机制 | 第16-22页 |
| 一、免疫系统的组成器官 | 第17页 |
| 二、细胞免疫特征 | 第17-19页 |
| 三、体液免疫特征 | 第19-21页 |
| 四、特异性免疫记忆 | 第21-22页 |
| 第三节 养殖甲壳动物病害防控的方法 | 第22-30页 |
| 一、优良养殖品种的选育 | 第22-23页 |
| 二、养殖生态环境的改善 | 第23-24页 |
| 三、免疫防控的原理与方法 | 第24-30页 |
| 第四节 免疫活性物质的导入途径 | 第30-32页 |
| 一、碳纳米管的应用 | 第31-32页 |
| 二、壳聚糖的应用 | 第32页 |
| 第五节 本研究的目的和意义 | 第32-34页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第34-54页 |
| 第一节 实验材料 | 第34-36页 |
| 一、实验动物 | 第34页 |
| 二、实验菌株和病毒 | 第34-35页 |
| 三、实验引物 | 第35页 |
| 四、主要缓冲液和化学试剂 | 第35-36页 |
| 五、主要仪器设备 | 第36页 |
| 第二节 实验方法 | 第36-54页 |
| 一、 CpG ODN- pUc 57 质粒的构建及大规模提取 | 第36页 |
| 二、大肠杆菌重组表达 VP28 和解脂耶罗维亚酵母表面展示 VP28 | 第36-37页 |
| 三、饲料制备 | 第37-38页 |
| 四、饲料投喂和红粉苔酸注射实验 | 第38-39页 |
| 五、 WSSV 病毒的粗提取 | 第39页 |
| 六、实验动物的处理、样品收集和死亡率的测定 | 第39-42页 |
| 七、蛋白原核重组表达和纯化复性 | 第42-44页 |
| 八、蛋白质浓度测定 | 第44页 |
| 九、多克隆抗体的制备 | 第44-45页 |
| 十、表达 VP28 的大肠杆菌和解脂耶罗维亚酵母的 Western 免疫印迹分析 | 第45页 |
| 十一、免疫荧光分析 | 第45-46页 |
| 十二、基因 mRNA 表达分析 | 第46-47页 |
| 十三、 WSSV 拷贝数的检测 | 第47-48页 |
| 十四、免疫指标的测定 | 第48-51页 |
| 十五、乳酸菌和红粉苔酸抑菌能力的检测 | 第51-52页 |
| 十六、对虾血淋巴细胞的原代培养 | 第52页 |
| 十七、纳米载药系统的建立和应用评价 | 第52-54页 |
| 第三章 结果与分析 | 第54-85页 |
| 第一节 CpG ODN 和 VP28-yl 对凡纳滨对虾的免疫保护作用 | 第54-67页 |
| 一、实验室养殖条件投喂 CpG ODN 和 VP28-yl 对凡纳滨对虾的免疫保护作用 | 第54-63页 |
| 二、田间中试实验投喂 CpG ODN 和 VP28-yl 对凡纳滨对虾的免疫保护作用 | 第63-67页 |
| 第二节 长双歧杆菌和嗜酸乳杆菌对中华绒螯蟹的免疫保护作用 | 第67-74页 |
| 一、乳酸菌对嗜水气单胞菌的体外抑制作用 | 第67-68页 |
| 二、嗜水气单胞菌侵染后中华绒螯蟹的累积死亡率变化 | 第68-69页 |
| 三、中华绒螯蟹溶菌酶活力的变化 | 第69页 |
| 四、中华绒螯蟹过氧化氢酶活力的变化 | 第69-70页 |
| 五、中华绒螯蟹活性氧活力的变化 | 第70-71页 |
| 六、中华绒螯蟹丙二醛含量的变化 | 第71-72页 |
| 七、中华绒螯蟹免疫相关因子 mRNA 时序表达的变化 | 第72-74页 |
| 第三节 红粉苔酸对中华绒螯蟹免疫保护作用的研究 | 第74-79页 |
| 一、红粉苔酸的分离和鉴定 | 第74页 |
| 二、嗜水气单胞菌感染后中华绒螯蟹的累积死亡率变化 | 第74-75页 |
| 三、中华绒螯蟹血细胞总量的变化 | 第75-76页 |
| 四、中华绒螯蟹血细胞吞噬作用的变化 | 第76-77页 |
| 五、中华绒螯蟹免疫相关酶活力的变化 | 第77-79页 |
| 第四节 应用碳纳米管和壳聚糖载体对免疫活性物导入途径的优化 | 第79-85页 |
| 一、碳纳米管-病毒灵在虾蟹血淋巴细胞中的定位 | 第79-81页 |
| 二、碳纳米管-病毒灵在对虾原代血淋巴细胞中的抗病毒效应 | 第81页 |
| 三、壳聚糖-CpG ODN 和壳聚糖-dsRNAie1 在对虾血淋巴细胞中的定位 | 第81-83页 |
| 四、壳聚糖载体的缓释作用 | 第83-84页 |
| 五、碳纳米管-病毒灵和壳聚糖-CpG ODN 在对虾原代血淋巴细胞中的毒性作用73 | 第84-85页 |
| 第四章 讨论 | 第85-103页 |
| 第一节 免疫活性物质的免疫增强作用及其作用机制 | 第85-95页 |
| 一、 CpG ODN 增强对虾抗病毒能力的作用机制 | 第85-88页 |
| 二、表面展示 VP28 的解脂耶罗维亚酵母对固有免疫系统的诱导作用 | 第88-90页 |
| 三、乳酸菌激活中华绒螯蟹固有免疫系统的作用机制 | 第90-93页 |
| 四、红粉苔酸激活中华绒螯蟹固有免疫系统的作用机制 | 第93-95页 |
| 第二节 免疫活性物质在甲壳动物养殖中应用前景的展望 | 第95-99页 |
| 一、 CpG ODN 的应用前景 | 第95页 |
| 二、表面展示 VP28 的解脂耶罗维亚酵母的应用前景 | 第95-96页 |
| 三、乳酸菌在甲壳动物养殖业中的应用评价 | 第96-97页 |
| 四、中草药和红粉苔酸等中草药次级代谢产物的应用可能 | 第97-99页 |
| 五、展望 | 第99页 |
| 第三节 新型导入途径在甲壳动物养殖中应用的可行性分析 | 第99-103页 |
| 一、碳纳米管载体系统 | 第100-101页 |
| 二、壳聚糖载体系统 | 第101-103页 |
| 第五章 结论 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-129页 |
| 作者简历及博士期间发表和完成的论文 | 第129-130
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