论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-17页 |
| 缩略语/符号说明 | 第17-19页 |
| 1. 前言 | 第19-30页 |
| 1.1 研究现状、成果 | 第19-26页 |
| 1.1.1 胶质瘤的研究现状 | 第19页 |
| 1.1.2 miR-320表达与功能异常是多种肿瘤发生发展的重要原因 | 第19-22页 |
| 1.1.3 SND1是恶性肿瘤细胞增殖和迁移侵袭的重要调控因子 | 第22-24页 |
| 1.1.4 β-catenin调节肿瘤细胞的增殖和迁移侵袭 | 第24-26页 |
| 1.1.5 当前存在的主要问题 | 第26页 |
| 1.2 研究目的、方法 | 第26-30页 |
| 1.2.1 研究目的 | 第26-27页 |
| 1.2.2 研究方法 | 第27-30页 |
| 2. 材料与方法 | 第30-52页 |
| 2.1 主要实验仪器 | 第30页 |
| 2.2 组织标本来源 | 第30-31页 |
| 2.3 研究所用细胞系及其来源 | 第31-32页 |
| 2.4 相关序列信息及来源 | 第32-34页 |
| 2.4.1 原位杂交探针 | 第32页 |
| 2.4.2 miR-320 mimics及相应无义对照序列 | 第32页 |
| 2.4.3 SND1及 β-catenin真核表达质粒 | 第32-33页 |
| 2.4.4 介导SND1沉默的重组慢病毒 | 第33页 |
| 2.4.5 qRT-PCR引物 | 第33-34页 |
| 2.5 主要试剂、耗材及试剂盒 | 第34页 |
| 2.6 实验方法及流程 | 第34-51页 |
| 2.6.1 原位杂交 | 第34-36页 |
| 2.6.2 免疫组织化学染色 | 第36-37页 |
| 2.6.3 GBM细胞系的培养 | 第37-38页 |
| 2.6.4 细胞转染 | 第38-39页 |
| 2.6.5 细胞感染 | 第39-40页 |
| 2.6.6 miRNA及mRNA的qRT-PCR检测 | 第40-43页 |
| 2.6.7 胶质瘤细胞系蛋白表达的Western Blot检测 | 第43-45页 |
| 2.6.8 双萤光素酶报告实验 | 第45-46页 |
| 2.6.9 细胞增殖活性的检测 | 第46-48页 |
| 2.6.10 细胞周期检测 | 第48-49页 |
| 2.6.11 迁移及侵袭实验 | 第49页 |
| 2.6.12 酶谱分析实验 | 第49-51页 |
| 2.7 统计学方法 | 第51-52页 |
| 3. 结果 | 第52-88页 |
| 3.1 miR-320a在人胶质瘤组织和GBM细胞系中表达异常降低 | 第52-56页 |
| 3.1.1 对照脑组织和不同级别胶质瘤组织中miR-320a的检测结果 | 第52-53页 |
| 3.1.2 胶质瘤miR-320a表达水平与患者生存期的关系 | 第53-55页 |
| 3.1.3 各GBM细胞系及永生化胶质细胞中miR-320a表达的检测结果 | 第55-56页 |
| 3.2 miR-320a可抑制GBM细胞系的增殖和迁移侵袭 | 第56-61页 |
| 3.2.1 转染miR-320a mimics可有效提高GBM细胞系miR-320a的含量 | 第56页 |
| 3.2.2 miR-320a对GBM细胞系增殖的影响 | 第56-58页 |
| 3.2.3 miR-320a对GBM细胞系迁移和侵袭的影响 | 第58-61页 |
| 3.3 胶质瘤细胞中miR-320a靶基因的预测与验证 | 第61-66页 |
| 3.3.1 miR-320a靶基因的生物信息学预测 | 第61-62页 |
| 3.3.2 双萤光素酶报告基因实验结果 | 第62-64页 |
| 3.3.3 miR-320a诱导胶质瘤细胞SND1及 β-catenin mRNA降解 | 第64-65页 |
| 3.3.4 miR-320a可敲低GBM细胞SND1及 β-catenin蛋白的表达 | 第65-66页 |
| 3.4 人胶质瘤组织中SND1及 β-catenin表达水平的检测结果 | 第66-73页 |
| 3.4.1 SND1及 β-catenin在人胶质瘤组织芯片中表达水平检测结果 | 第66-68页 |
| 3.4.2 胶质瘤 β-catenin表达水平与患者生存期的关系 | 第68-69页 |
| 3.4.3 胶质瘤SND1表达水平与患者生存期的关系 | 第69-70页 |
| 3.4.4 胶质瘤Ki-67与miR-320a、SND1及 β-catenin表达水平相关性检测 | 第70-71页 |
| 3.4.5 单因素及多因素Cox回归分析结果 | 第71-73页 |
| 3.5 miR-320a抑制胶质瘤细胞增殖的分子机制 | 第73-78页 |
| 3.5.1 miR-320a通过敲低SND1和 β-catenin抑制GBM细胞的增殖 | 第73-75页 |
| 3.5.2 miR-320a通过靶向 β-catenin和SND1影响胶质瘤细胞周期分布 | 第75-76页 |
| 3.5.3 miR-320a通过靶向SND1和 β-catenin调控p21~(WAF1)和cyclin D1的表达 | 第76-78页 |
| 3.6 miR-320a抑制GBM细胞迁移侵袭的分子机制 | 第78-82页 |
| 3.6.1 miR-320a通过靶向SND1和 β-catenin抑制胶质瘤细胞的迁移侵袭 | 第78-79页 |
| 3.6.2 miR-320a抑制MMP2和MMP7的表达水平和细胞外液活性 | 第79-81页 |
| 3.6.3 miR-320a通过靶向SND1和 β-catenin调控MMP2和MMP7的表达 | 第81-82页 |
| 3.7 miR-320a通过敲低SND1表达抑制TGFβ 通路的活性 | 第82-88页 |
| 3.7.1 稳定敲低SND1表达的GBM亚细胞系的建立 | 第82-83页 |
| 3.7.2 GBM各亚细胞系细胞迁移侵袭能力的比较 | 第83-85页 |
| 3.7.3 GBM各亚细胞系Smad2、Smad4及MMP2表达水平的比较 | 第85-88页 |
| 4. 讨论 | 第88-102页 |
| 4.1 胶质瘤中普遍存在miR-320a表达的异常降低 | 第88-90页 |
| 4.2 miR-320a可调控胶质瘤细胞的多种生物学行为 | 第90页 |
| 4.3 miR-320a可有效抑制胶质瘤细胞SND1和 β-catenin表达 | 第90-92页 |
| 4.4 miR-320a低表达是SND1和 β-catenin表达异常的重要机制 | 第92-94页 |
| 4.5 miR-320a和SND1 LI%是胶质瘤患者预后的独立预测因子 | 第94-95页 |
| 4.6 SND1和 β-catenin介导miR-320a对胶质瘤细胞增殖的抑制作用 | 第95-97页 |
| 4.7 miR-320a通过SND1和 β-catenin抑制胶质瘤细胞的迁移侵袭 | 第97-99页 |
| 4.8 总结与展望 | 第99-102页 |
| 5. 全文结论 | 第102-103页 |
| 论文创新点 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-117页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第117-118页 |
| 综述 miR-320家族研究进展 | 第118-137页 |
| 参考文献 | 第128-137页 |
| 致谢 | 第137-138页 |
| 个人简历 | 第138页 |
