论文目录 | |
| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-22页 |
| 前言 | 第22-24页 |
| 第一章 白纹伊蚊嗅觉受体的克隆、鉴定及表达谱分析 | 第24-44页 |
| 1 材料 | 第24-27页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第24页 |
| 1.2 实验株白纹伊蚊及其饲养 | 第24页 |
| 1.3 主要试剂 | 第24页 |
| 1.4 主要仪器 | 第24-25页 |
| 1.5 本章使用的引物 | 第25-27页 |
| 1.6 溶液及培养基的配制 | 第27页 |
| 2 实验方法 | 第27-34页 |
| 2.1 总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.2 去除总RNA中的DNA污染 | 第28页 |
| 2.3 合成cDNA | 第28-29页 |
| 2.4 引物的设计与合成 | 第29-30页 |
| 2.5 目的基因的PCR扩增 | 第30页 |
| 2.6 切胶回收 | 第30页 |
| 2.7 目的基因的连接 | 第30-31页 |
| 2.8 成蚊不同组织总RNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.9 表达谱 | 第32页 |
| 2.10 RACE-ready cDNA的合成 | 第32-33页 |
| 2.11 巢式PCR(nested PCR) | 第33页 |
| 2.12 分子进化树分析 | 第33页 |
| 2.13 跨膜结构域预测 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-41页 |
| 3.1 白纹伊蚊AalORs的克隆及其命名 | 第34页 |
| 3.2 组织特异性表达谱 | 第34-37页 |
| 3.3 PCR扩增AalORs基因序列 | 第37-39页 |
| 3.4 系统进化树分析 | 第39-40页 |
| 3.5 嗅觉受体跨膜结构域预测 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 小结 | 第43-44页 |
| 第二章 白纹伊蚊AalORs基因的HEK293细胞内功能分析 | 第44-64页 |
| 1 材料 | 第44-48页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第44页 |
| 1.2 实验用白纹伊蚊及其饲养 | 第44页 |
| 1.3 细胞 | 第44页 |
| 1.4 主要试剂 | 第44-45页 |
| 1.5 主要仪器 | 第45页 |
| 1.6 溶液及培养基的配制 | 第45-48页 |
| 1.7 本章使用的引物 | 第48页 |
| 2 实验方法 | 第48-55页 |
| 2.1 总RNA的提取及逆转录 | 第48页 |
| 2.2 目的基因的PCR扩增、回收及测序 | 第48-49页 |
| 2.3 表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 2.4 无内毒素质粒中提 | 第50-51页 |
| 2.5 细胞复苏 | 第51页 |
| 2.6 细胞传代 | 第51-52页 |
| 2.7 转染细胞 | 第52页 |
| 2.8 HEK293细胞中目的基因的表达 | 第52-54页 |
| 2.9 HEK293细胞钙成像实验 | 第54-55页 |
| 2.10 本章所用的统计学方法 | 第55页 |
| 3 结果 | 第55-62页 |
| 3.1 表达载体的构建和鉴定 | 第55-56页 |
| 3.2 目的基因的表达与鉴定 | 第56-59页 |
| 3.3 钙成像实验 | 第59-62页 |
| 4 讨论 | 第62-63页 |
| 小结 | 第63-64页 |
| 第三章 白纹伊蚊AalORs基因在转基因果蝇体内功能分析 | 第64-80页 |
| 1 材料 | 第64-66页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第64页 |
| 1.2 转基因果蝇及其饲养 | 第64页 |
| 1.3 实验用白纹伊蚊及其饲养 | 第64页 |
| 1.4 主要试剂 | 第64-65页 |
| 1.5 主要仪器 | 第65页 |
| 1.6 溶液及培养基的配制 | 第65-66页 |
| 2 实验方法 | 第66-69页 |
| 2.1 表达载体的构建 | 第66-67页 |
| 2.2 转基因果蝇的构建和筛选 | 第67-68页 |
| 2.3 电生理实验(Electroantennogram recordings,EAG) | 第68页 |
| 2.4 果蝇Y型管行为实验 | 第68-69页 |
| 2.5 本章所用的统计学方法 | 第69页 |
| 3 结果 | 第69-77页 |
| 3.1 转基因果蝇的构建和筛选 | 第69-70页 |
| 3.2 转基因果蝇的鉴定 | 第70-71页 |
| 3.3 果蝇电生理实验(Electroantennogram recordings,EAG) | 第71-76页 |
| 3.4 果蝇Y型管行为实验 | 第76-77页 |
| 4. 讨论 | 第77-79页 |
| 小结 | 第79-80页 |
| 第四章 白纹伊蚊AalORs基因的knockdown分析 | 第80-96页 |
| 1 材料 | 第80-82页 |
| 1.1 实验用白纹伊蚊及其饲养 | 第80页 |
| 1.2 主要试剂 | 第80页 |
| 1.3 主要仪器 | 第80-81页 |
| 1.4 DNA电泳缓冲液的配制 | 第81页 |
| 1.5 本章使用的引物 | 第81-82页 |
| 2 实验方法 | 第82-84页 |
| 2.1 RNAi | 第82页 |
| 2.2 总RNA的提取及逆转录 | 第82页 |
| 2.3 荧光定量PCR(qRT-PCR)检测靶标基因 | 第82页 |
| 2.4 行为实验 | 第82-83页 |
| 2.5 电生理实验(Electroantennogram recordings,EAG) | 第83页 |
| 2.6 本章所用的统计学方法 | 第83-84页 |
| 3 结果 | 第84-94页 |
| 3.1 RNAi效果的检测 | 第84-88页 |
| 3.2 白纹伊蚊行为实验 | 第88-94页 |
| 3 讨论 | 第94页 |
| 小结 | 第94-96页 |
| 总结 | 第96-100页 |
| 参考文献 | 第100-109页 |
| 综述 | 第109-123页 |
| 参考文献 | 第115-123页 |
| 致谢 | 第123-126页 |
| 缩略词汇表 | 第126-134页 |
| 博士期间成果 | 第134-135页 |
