论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 引言 | 第12-16页 |
| 第一部分 BPDE致癌相关基因的全基因组筛选 | 第16-85页 |
| 前言 | 第16页 |
| 材料和方法 | 第16-39页 |
| 一、小鼠肺组织基因组DNA的提取及AFLP DNA片段的制备 | 第16-18页 |
| (一)、小鼠肺组织基因组DNA的提取 | 第16-17页 |
| 1、主要仪器 | 第16页 |
| 2、主要材料和试剂 | 第16页 |
| 3、主要试剂的配制 | 第16-17页 |
| 4、方法步骤 | 第17页 |
| (二)、双酶切制备AFLP DNA片段 | 第17-18页 |
| 1、主要仪器 | 第18页 |
| 2、主要试剂 | 第18页 |
| 3、方法步骤 | 第18页 |
| 二、与BPDE相互作用的AFLP DNA片段的免疫纳米磁性富集、分离和AFLP PCR扩增 | 第18-25页 |
| (一)、免疫纳米磁性颗粒的制备 | 第18-19页 |
| 1、主要材料和试剂 | 第18-19页 |
| 2、主要试剂的配制 | 第19页 |
| 3、方法 | 第19页 |
| (二)、AFLP DNA片段的免疫纳米磁性富集、分离 | 第19-21页 |
| 1、主要试剂 | 第20页 |
| 2、主要试剂的配制 | 第20页 |
| 3、方法 | 第20-21页 |
| (三)、AFLP PCR扩增 | 第21-25页 |
| 1、主要仪器 | 第21页 |
| 2、主要材料和试剂 | 第21-23页 |
| 3、主要试剂的配制 | 第23页 |
| 4、方法 | 第23-25页 |
| 三、AFLP选择性扩增PCR产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染 | 第25-32页 |
| (一)、AFLP选择性扩增PCR产物的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(变性PAGE) | 第25-29页 |
| 1、主要仪器 | 第25页 |
| 2、主要试剂 | 第25-26页 |
| 3、溶液配制 | 第26-27页 |
| 4、方法步骤 | 第27-29页 |
| (二)、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶的银染: | 第29-32页 |
| 1、主要仪器和材料 | 第29页 |
| 2、主要试剂 | 第29-30页 |
| 3、溶液配制 | 第30页 |
| 4、染色程序 | 第30-32页 |
| 四、差异片段的回收、扩增、克隆、测序及BLAST检索分析 | 第32-39页 |
| (一)、差异片段的回收和扩增 | 第32-33页 |
| 1、主要仪器和材料 | 第32页 |
| 2、主要试剂 | 第32页 |
| 3、方法 | 第32-33页 |
| (二)、差异片段的克隆和测序 | 第33-37页 |
| 1、主要仪器 | 第33页 |
| 2、主要试剂 | 第33页 |
| 3、主要试剂的配制 | 第33-34页 |
| 4、方法 | 第34-37页 |
| (三)、BLAST序列相似性检索分析 | 第37-39页 |
| 结果 | 第39-78页 |
| 一、小鼠肺组织基因组DNA的提取 | 第39页 |
| 二、双酶切制备AFLP DNA片段 | 第39-40页 |
| 三、AFLP预扩增PCR产物 | 第40-41页 |
| 四、AFLP选择性扩增PCR产物 | 第41页 |
| 五、选择性扩增引物组合筛选实验 | 第41-42页 |
| 六、免疫磁性分离AFLP选择性扩增聚丙烯酰胺凝胶电泳图 | 第42-45页 |
| 七、差异片段的回收和PCR再扩增 | 第45页 |
| 八、差异DNA片段的克隆、测序及同源相似性比对分析 | 第45-78页 |
| 1、差异DNA片段的克隆与鉴定 | 第45-46页 |
| 2、差异DNA片段的核苷酸序列分析 | 第46-66页 |
| 3、差异DNA片段核苷酸序列的同源相似性比对分析 | 第66-78页 |
| 讨论 | 第78-84页 |
| 小结 | 第84-85页 |
| 第二部分 RNAi抑制A549肺癌细胞中EFNB2基因 表达的初步研究 | 第85-108页 |
| 前言 | 第85页 |
| 材料和方法 | 第85页 |
| 一、EFNB2基因在A549肺癌细胞中的表达 | 第85-91页 |
| (一)、A549细胞的培养及形态学观察 | 第85-87页 |
| 1、主要仪器 | 第85页 |
| 2、主要试剂 | 第85-86页 |
| 3、细胞 | 第86页 |
| 4、方法 | 第86-87页 |
| (二)、免疫荧光检测EFNB2蛋白在A549细胞中的表达 | 第87-88页 |
| 1、主要仪器 | 第87页 |
| 2、主要试剂 | 第87-88页 |
| 3、溶液和试剂的配制 | 第88页 |
| 4、方法 | 第88页 |
| (三)、RT-PCR检测EFNB2 mRNA在A549细胞中的表达 | 第88-91页 |
| 1、主要仪器 | 第88页 |
| 2、主要试剂 | 第88-89页 |
| 3、方法 | 第89-91页 |
| 二、RNAi对A549肺癌细胞EFNB2基因表达的影响 | 第91-93页 |
| 1、EFNB2基因RNAi质粒表达载体 | 第91-92页 |
| 2、EFNB2基因RNAi质粒表达载体转染A549肺癌细胞 | 第92-93页 |
| 3、RNAi质粒表达载体对A549肺癌细胞EFNB2基因mRNA和蛋白表达的影响 | 第93页 |
| 三、RNAi抑制EFNB2基因表达对A549肺癌细胞体外增殖、粘附及侵袭能力的影响 | 第93-97页 |
| 1、RNAi抑制EFNB2基因表达对A549肺癌细胞体外增殖能力的影响(平板克隆形成试验) | 第93-94页 |
| 2、RNAi抑制EFNB2基因表达对A549肺癌细胞体外粘附能力的影响(血管内皮细胞粘附试验) | 第94-95页 |
| 3、RNAi抑制EFNB2基因表达对A549肺癌细胞体外侵袭能力的影响(Transwell侵袭小室试验) | 第95-97页 |
| 结果 | 第97-102页 |
| 一、EFNB2基因在A549肺癌细胞中的表达 | 第97-98页 |
| 1、A549肺癌细胞的形态学观察 | 第97页 |
| 2、A549肺癌细胞中EFNB2 mRNA的表达 | 第97-98页 |
| 3、A549肺癌细胞中EFNB2蛋白的表达 | 第98页 |
| 二、RNAi对A549肺癌细胞EFNB2基因表达的影响 | 第98-100页 |
| 1、RNAi质粒表达载体转染A549肺癌细胞 | 第98页 |
| 2、RNAi对A549肺癌细胞EFNB2 mRNA表达的影响 | 第98-99页 |
| 3、RNAi对A549肺癌细胞EFNB2蛋白表达的影响 | 第99-100页 |
| 三、RNAi抑制EFNB2基因表达对A549肺癌细胞的影响 | 第100-102页 |
| 1、RNAi抑制EFNB2基因表达对A549肺癌细胞体外增殖能力的影响(平板克隆形成试验) | 第100页 |
| 2、RNAi抑制EFNB2基因表达对A549肺癌细胞体外粘附能力的影响(血管内皮细胞粘附试验) | 第100-101页 |
| 3、RNAi抑制EFNB2基因表达对A549肺癌细胞体外侵袭能力的影响(Transwell侵袭小室试验) | 第101-102页 |
| 讨论 | 第102-107页 |
| 小结 | 第107-108页 |
| 结论 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 缩略词表 | 第119-121页 |
| 文献综述 | 第121-137页 |
| 发表论文全文 | 第137-148页 |
