CRISPR/Cas9基因敲除技术在家蚕基因功能研究中的应用



CRISPR/Cas9基因敲除技术在家蚕基因功能研究中的应用

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CRISPR/Cas9基因敲除技术在家蚕基因功能研究中的应用

论文目录
中文摘要	第1-11页
Abstract	第11-14页
主要英文缩写与译名	第14-15页
第一章文献综述	第15-35页
1. 引言	第15页
2. CRISPR/Cas系统介绍	第15-21页
2.1 CRISPR/Cas系统的来源	第16页
2.2 CRISPR/Cas系统的组成和结构特点	第16-19页
2.2.1 CRISPR结构	第16-17页
2.2.2 Cas基因	第17-18页
2.2.3 CRISPR/Cas系统的分类	第18-19页
2.3 CRISPR/Cas系统的工作机理	第19-21页
3. CRISPR/Cas9系统的应用	第21-26页
3.1 CRISPR/Cas9研究现状	第21-22页
3.2 CRISPR/Cas9在基因编辑中的应用	第22-23页
3.3 CRISPR/Cas9敲除基因的机制	第23-24页
3.4 CRISPR/Cas9脱靶效应	第24-25页
3.5 CRISPR/Cas9其他方面的应用	第25-26页
4. 家蚕丝腺介绍	第26-30页
4.1 家蚕丝腺的形态特点与功能	第26-27页
4.2 家蚕丝腺的组织结构	第27-28页
4.3 家蚕丝腺的发育概况	第28-30页
4.3.1 家蚕丝腺发育的基本过程	第28页
4.3.2 家蚕丝腺发育的分子机理	第28-30页
5. 家蚕Bmsage基因研究概况	第30-31页
6. 反向遗传学技术	第31-32页
7. 第二代高通量测序技术	第32-33页
8. 研究目的及意义	第33页
9. 主要内容	第33-34页
9.1 利用CRISPR/Cas9研究家蚕体壁等相关基因的功能	第33页
9.2 利用CRISPR/Cas9研究家蚕丝腺相关基因的功能	第33-34页
10. 技术路线	第34-35页
第二章利用CRISPR/Cas9研究家蚕体壁相关基因的功能	第35-61页
1. 引言	第35-36页
2. 实验材料与方法	第36-47页
2.1 实验材料	第36-39页
2.1.1 家蚕	第36页
2.1.2 主要实验仪器	第36-37页
2.1.3 主要试剂和试剂盒	第37页
2.1.4 主要试剂的配制	第37-38页
2.1.5 DNA测序	第38-39页
2.2 实验方法	第39-47页
2.2.1 蚕卵滞育性的解除	第39页
2.2.2 CRISPR/Cas9靶点设计	第39页
2.2.3 所选基因靶点序列的确认	第39-40页
2.2.4 Cas9-mRNA的体外合成	第40-42页
2.2.5 sgRNA的体外合成	第42-44页
2.2.6 家蚕卵的显微注射	第44-45页
2.2.7 突变率和突变类型的检测	第45-46页
2.2.8 脱靶效应的检测	第46页
2.2.9 突变体表型筛选	第46-47页
2.2.10 蛾子交配策略	第47页
3. 实验结果	第47-59页
3.1 Bm-ok敲除结果	第48-54页
3.2 BmKMO、BmTH和Bmtan敲除结果	第54-57页
3.3 脱靶效应的检测	第57-59页
4. 讨论	第59-61页
第三章利用CRISPR/Cas9研究家蚕丝腺发育相关基因的功能	第61-76页
1. 引言	第61页
2. 实验材料与方法	第61-62页
2.1 实验材料	第61-62页
2.1.1 家蚕	第61页
2.1.2 主要实验仪器	第61页
2.1.3 主要试剂和试剂盒	第61-62页
2.1.4 DNA测序	第62页
2.2 实验方法	第62页
2.2.1 Bmsage注射死胚的检测	第62页
2.2.2 Bmsage G_0代蛾子的检测	第62页
2.2.3 Bmsage突变体筛选和表型分析	第62页
2.2.4 Bmsage突变体表型的确认	第62页
3. 实验结果	第62-74页
3.1 Bmsage靶点设计及确认	第62-64页
3.2 Bmsage突变率	第64-65页
3.3 Bmsage突变体表型的分析和筛选	第65-70页
3.3.1 Bmsage G_0代蛾子的交配	第65-66页
3.3.2 Bmsage G_1代突变体筛选	第66页
3.3.3 Bmsage G_2代纯合突变体筛选	第66-67页
3.3.4 Bmsage突变体表型分析	第67-69页
3.3.5 Bmsage突变体胚胎期丝腺形态	第69-70页
3.3.6 不同基因型的Bmsage突变体筛选	第70页
3.4 Bmsage突变体化蛹期的生长情况	第70-72页
3.5 Bmsage突变体蛾子生长情况	第72页
3.6 Bmsage敲除的脱靶效应	第72-74页
4. 讨论	第74-76页
第四章家蚕Bmsage丝腺缺失突变体的RNA-seq分析	第76-90页
1. 引言	第76页
2. 实验材料与方法	第76-79页
2.1 实验材料	第76-77页
2.1.1 家蚕	第76-77页
2.1.2 主要实验仪器	第77页
2.1.3 主要试剂	第77页
2.2 实验方法	第77-79页
2.2.1 样品制备和上机测序	第77-78页
2.2.2 测序数据生物信息学分析	第78页
2.2.3 qRT-PCR验证基因表达水平	第78-79页
3. 实验结果	第79-87页
3.1 RNA-seq数据预处理	第79-80页
3.2 qRT-PCR验证结果	第80-81页
3.3 差异基因分析与筛选	第81-83页
3.4 差异基因的GO、KEGG信号通路分析	第83-87页
3.4.1 差异基因的GO分析	第83-84页
3.4.2 差异基因的KEGG信号通路分析	第84-86页
3.4.3 差异基因的WEGO分析	第86-87页
4. 讨论	第87-90页
第五章结论及后续研究展望	第90-93页
1. 主要结论	第90-91页
2. 创新点	第91页
3. 后续研究展望	第91-93页
参考文献	第93-109页
附录	第109-111页
1. 攻读博士学位期间发表论文	第109-110页
2. 参与课题	第110-111页
致谢	第111页

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