论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-10
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| 英文摘要 | 第10-13
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| 第一部分 文献综述 | 第13-28
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| 1 关于miRNA | 第13-23
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| · miRNA的概念、生物学特性 | 第13-14
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| · miRNA的发生 | 第14-15
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| · miRNA的作用机制 | 第15-17
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| · miRNA指导靶mRNA的切割 | 第16
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| · miRNA指导抑制mRNA的翻译 | 第16-17
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| · miRNA与siRNA | 第17-18
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| · 植物miRNA | 第18-20
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| · 植物miRNA特征 | 第18
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| · 植物miRNA的功能 | 第18-20
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| · 植物miRNA的研究方法 | 第20-23
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| · 识别miRNA的途径 | 第20-21
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| · miRNA的表达分析方法 | 第21-22
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| · miRNA功能分析方法 | 第22-23
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| 2 植物花粉的发育与玉米细胞质雄性不育 | 第23-27
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| · 植物花粉发育过程 | 第23-24
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| · 关于玉米细胞质雄性不育 | 第24-27
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| · 玉米CMS的分类 | 第24
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| · 植物细胞质雄性不育的生理生化特征 | 第24-25
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| · 植物细胞质雄性不育的分子机制 | 第25-27
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| 3 本研究的目的意义 | 第27-28
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| 第二部分 材料与方法 | 第28-48
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| 1 实验材料 | 第28-29
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| · 玉米供试材料 | 第28
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| · 克隆载体及宿主菌 | 第28
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| · 主要试剂 | 第28-29
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| · 试剂盒 | 第28
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| · 酶类以及相关试剂 | 第28-29
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| · 试验主要仪器设备 | 第29
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| 2 实验方法 | 第29-48
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| · 花药总RNA提取 | 第29-30
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| · 花药小分子RNA分离 | 第30-31
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| · miRNA的克隆 | 第31-40
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| · 小分子RNA 5′去磷酸化处理 | 第31-33
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| · 小分子RNA 3′接头的连接 | 第33
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| · 小分子RNA 3′MAGNOTEX-SA的吸附 | 第33-34
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| · 小分子RNA 5′末端磷酸化 | 第34-35
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| · 小分子RNA的反转录 | 第35-36
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| · PCR扩增 | 第36-37
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| · PCR片段的纯化及切胶回收 | 第37-39
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| · PCR片段的连接 | 第39
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| · CaCl_2法制备大肠杆菌DH5α感受态 | 第39-40
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| · 热激法转化 | 第40
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| · 阳性克隆的PCR检测及测序 | 第40-42
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| · 序列的生物信息学分析 | 第42-43
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| · miRNA数据库比对 | 第42
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| · 前体发夹结构预测 | 第42-43
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| · 候选miRNA的验证及表达分析 | 第43-47
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| · miRNA候选靶基因表达差异分析 | 第47-48
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| 第三部分 结果与分析 | 第48-73
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| 1 花药总RNA与小分子RNA提取结果 | 第48
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| 2 小分子RNA两端连接接头、逆转录PCR扩增结果 | 第48-49
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| 3 回收产物后续操作 | 第49-51
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| 4 新发现的玉米miRNA | 第51-55
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| 5 miRNA保守性鉴定 | 第55-56
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| 6 miRNA真实性验证 | 第56-58
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| 7 miRNA靶基因预测 | 第58-62
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| 8 miRNA在花药中的相对表达量 | 第62-70
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| · 5s rRNA和miRNA加尾产物扩增溶解曲线 | 第62-63
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| · 荧光定量的标准曲线 | 第63-65
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| · miRNA在花药中的相对表达量 | 第65-70
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| · miR-1的相对表达量 | 第66
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| · miR-2的相对表达量 | 第66
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| · miR-3的相对表达量 | 第66-67
页 |
| · miR-4的相对表达量 | 第67
页 |
| · miR-5的相对表达量 | 第67-68
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| · miR-6的相对表达量 | 第68
页 |
| · miR-7的相对表达量 | 第68
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| · miR-8的相对表达量 | 第68-69
页 |
| · miR-9的相对表达量 | 第69
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| · miR-10的相对表达量 | 第69-70
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| 9 MADS-box和Zein-alpha在N48-2和C48-2中的表达情况 | 第70-73
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| · MADS-box他Zein-alpha的RT-PCR检测 | 第70-71
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| · 溶解曲线及标准曲线分析 | 第71-72
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| · MADS-box和Zein-alpha的定量分析 | 第72-73
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| 第四部分 讨论 | 第73-85
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| 1 对玉米花药miRNA鉴定的意义 | 第73
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| 2 miRNA的生物信息学鉴定与克隆鉴定 | 第73-74
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| 3 本研究所构建的小分子RNA文库 | 第74
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| 4 玉米花药中鉴定的miRNA | 第74-75
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| 5 miRNA的靶基因 | 第75-82
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| · MADS-box与雄性不育 | 第75-76
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| · α-醇溶蛋白与花粉败育 | 第76-77
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| · NADH脱氢酶与花粉败育 | 第77-78
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| · 细胞色素P450单加氧酶与花粉败育 | 第78-79
页 |
| · 二氢黄铜醇-4-还原酶与花粉败育 | 第79-80
页 |
| · 拟HSP33蛋白与花粉发育 | 第80-81
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| · 其它转录因子与花粉败育 | 第81-82
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| 6 miRNA的调控与雄性败育时期 | 第82
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| 7 由miRNA调控的雄性败育机理探讨 | 第82-83
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| 8 展望 | 第83-85
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| 第五部分 结论 | 第85-87
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| 参考文献 | 第87-98
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| 致谢 | 第98
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